background image

ния

 

заполняют камеру Горяева и через 5

 – 

10 мин с помощью

 

микроскопа с 

фазово

-

контрастным  устройством  (объектив 

40

×

,  окуляр 

7

×

)  подсчитывают 

количество спор в 10 больших квадратах сетки. Число спор (ОК) в 1 ампуле 
(1 мл) исходной вакцины определяют по формуле:

 

ОК = 25000

 

 

.

n

 

 

p

где

:  

n

 – 

количество спор в 10 больших квадратах;

 

p

 – 

кратность разведения;

 

25000 – 

постоянная величина для камеры данного типа.

 

2. Количество живых спор. 

Количество

 

живых спор

 

должно

 

составлять 

не менее 40

 % 

от общей концентрации.

 

В  исследованиях используют  агар  Хоттингера 

– 

аминный азот 

(230  ± 

10) 

мг

 %, 

рН 

(7,2 ± 0,1) – 

или мясопептонный агар (МПА), рН 

(7,2 ± 0,1). 

При определении содержания живых микробных клеток в вакцине ис-

пользуют  концевые  химически  чистые  пипетки  и  пробирки  со  стерильной 
водой

 

очищенной

Содержимое каждой из 

ампул ресуспендируют в 1 мл стерильной во-

ды очищенной,

 

встряхивают до образования гомогенной взвеси.

 

Содержимое 

каждой

 

ампулы  с  помощью  стерильных  пипеток  переносят  в 

стерильные 

колбы вместимостью 250 мл с 99 мл воды

 

очищенной

 

и фарфоровыми или 

стеклянными бусами и закрывают ватно

-

марлевыми пробками. Колбы

 

поме-

щают на шуттель

-

аппарат и

 

выдерживают 

 

в течение 30 мин при температуре 

(20 ± 

2) °С и скорости 

50 

покачиваний в минуту.

 

Исходя из

 

общей концентрации спор, определенной в камере Горяева, 

взвесь спор десятикратно разводят водой очищенной до содержания

 

пример-

но 1000 спор в 1 мл. Например, из взвеси спор, разведенной в колбе в 100 раз, 
делают 5 последовательных десятикратных разведений,  используя  для каж-
дого разведения отдельную пипетку вместимостью 1 мл, и получают

 

послед-

нее разведение 

10

-7

, в котором будет содержаться 1000 спор/мл

.  

5301