background image

В данном растворе

  

эритроциты можно хранить при температуре (4 

±

 2) 

°

С в

 

течение 1

2 нед. Перед употреблением эритроциты необходимо трехкратно 

отмыть фосфатным буферным раствором с помощью центрифугирования при 

(800 ± 200) 

об/мин в течение 10 мин.

 

3.Приготовление  консервирующего  5  %  раствора  натрия  цитрата.

  5% 

раствор натрия цитрата перед использованием разводят в 2 раза 0,1 М фос-

фатным  буферным  раствором.  К  одной  части  полученного  раствора  натрия 

цитрата  добавляют  2  части  крови  петухов.  В  данном  растворе  эритроциты 

могут храниться при температуре (4 

±

 2) 

°

С в течение 3

 – 

5 сут

Метод  постановки  РТГА  с  вирусом  гриппа  (микрометод). 

Принцип 

метода, его учет и ингредиенты для реакции, проводимой микрометодом, те 
же, что и для проведения РТГА макрометодом. Отличие методов заключает-
ся в изменении концентрации и объемов ингредиентов.

 

Реакцию ставят на микропанели с «U»

-

образными лунками.

 

1. Приготовление 0,5 % взвеси куриных эритроцитов. Взвесь готовят из 

1 % суспензии эритроцитов (макрометод) разведением ее в 2 раза фосфатным 
буферным раствором (в соотношении 1:1).

 

2. Определение гемагглютинирующего титра антигена. В каждую лун-

ку микропанели одного ряда вносят фосфатный буферный раствор в объеме 
50 мкл. Затем в первую лунку вносят 50 мкл антигена в разведении 1:10 и да-
лее проводят титрование по принципу двукратного разведения. Из последней 
лунки удаляют 50 мкл. Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл 0,5 % суспен-
зии эритроцитов. Содержимое лунок перемешивают встряхиванием и остав-
ляют при комнатной температуре на 40 

– 

45 мин до оседания эритроцитов в 

контроле.

 

Реакцию оценивают по «четырехкрестовой» системе. За титр антигена, 

или одну агглютинирующую единицу (АЕ), принимают наибольшее разведе-
ние  антигена,  дающее  четко  выраженную  агглютинацию  эритроцитов 

(+++ 

или ++++).

 

Определение титра антигена сопровождается постановкой отрицатель-

ного контроля на отсутствие спонтанной агглютинации эритроцитов. В каче-
стве  отрицательного  контроля  служат  несколько  лунок  панели,  в  которые 
вместо антигена внесен фосфатный буферный раствор.

 

5394