background image

Метод  постановки  РТГА  с  вирусом  гриппа  (макрометод). 

РТГА 

применяют для установления типа и подтипа вируса, т.е.  специфичности, а 
также  для  определения  нарастания  титров  специфических  антител. 
Постановка  РТГА  включает  следующие  этапы:  приготовление  взвеси 
эритроцитов,  определение  гемагглютинирующего  титра  антигена  в  реакции 
гемагглютинации  (РГА)  и рабочей дозы вируса, постановка самой реакции. 
Для постановки реакции необходимы следующие ингредиенты: 

 

 

исследуемый  антиген  (вакцина,  вируссодержащая  жидкость 

– 

аллантоисная или культуральная);

 

 

иммунные  сыворотки  к  различным  типам  (А  и  В)  и  субтипам 

типа А вируса гриппа;

 

 

фосфатный буферный раствор рН 7,2 

±

 0,2 

(ФБР)

 

суспензия куриных эритроцитов, 1

 %. 

1. Приготовление взвеси куриных эритроцитов

Для постановки РТГА 

используют  эритроциты  петухов.  Кровь  у  петухов  берут  из  сердца  или 
подкрыльцевой вены.

 

Свежеполученную  кровь  от  3

  – 

5  петухов  помещают  во  флакон  со 

стеклянными бусами или с одним из антикоагулянтов (раствор Альсевера, 

 

%  раствор  натрия  цитрата).  Дефибринирование  крови  проводят 

немедленно путем интенсивного встряхивания флакона в течение 5

  – 

7 мин 

при температуре (20 

±

 2) 

°

С до выпадения волокон фибрина.

 

Дефибринированную  кровь  фильтруют  через  4  слоя  марли,  затем 

трехкратно  отмывают  ФБР  путем  центрифугирования  при  1500  об/мин  в 
течение  5  мин  или  800±200  об/мин  в  течение  (15±5)  мин».  Надосадочную 
жидкость  удаляют.  Из  осадка,  принимаемого  за  100  %,  готовят  1

  % 

суспензию куриных эритроцитов по объему.

 

2.  Определение  гемагглютинирующего  титра  антигена

В  лунках 

агглютинационнного  планшета

 

готовят  двукратные  разведения  антигена  в 

объеме 0,4 мл на фосфатном буферном растворе, начиная с 1:10 

 

до 1:1280. В 

5405