background image

1.

 

Удаление  неспецифических  ингибиторов  гемагглютинации  из 

иммунных  сывороток  с  помощью  нейраминидазы  холерных  вибрионов

 

или 

RDE-

реагентом.  При  наличии  инструкции  по  применению  коммерческого 

реактива  необходимо  следовать  требованиям,  изложенным  в  данном 

документе.

 

Метод  основан  на  способности  нейраминидазы  холерных  вибрионов, 

не  действуя  на  специфические  антитела,  разрушать  ингибиторы 

гемагглютинации к вирусам гриппа А и В в сыворотках крови человека, кур, 

крыс, кролика.

 

Добавить к 1 объему сыворотки 3 объема реагента нейраминидазы. К 

смеси,  состоящей  из  0,1  мл  сыворотки  и  0,3  мл  реагента  нейраминидазы

добавляют  0,6  мл  фосфатного  буферного  раствора,  чтобы  получить 

разведение сыворотки 1:10. Смесь инкубируют при температуре (37 

±

 2) 

°

С в 

течение 18 

– 

20 час и затем прогревают при температуре (56 

±

 2) 

°

С в течение 

30 мин.

 

Сыворотка,  обработанная  нейраминидазой,  может  быть  использована 

для  РТГА  в  течение  2  недель  при  условии  ее  хранения  при  температуре 

(5 

±

 1) 

°

С.

 

2.

 

Приготовление 0,1 М раствора фосфатного буферного 

(

рН 7,2 

±

 

0,2). 

Раствор  1.

 

В  мерную  колбу  вместимостью  1000  мл  помещают  17,8  г 

натрия фосфата двузамещенного 2 

– 

водного

 (Na

2

HPO

4

2H

2

O), 

растворяют в 

500 мл воды очищенной, доводят объём раствора тем же растворителем до 

метки и перемешивают.

 

Раствор  2.

 

В  мерную  колбу  вместимостью  1000  мл  помещают  15,6  г 

натрия фосфата однозамещённого 2

водного

 (NaH

2

PO

4∙2

H

2

O), 

растворяют в 

500 мл воды очищенной, доводят объём раствора тем же растворителем до 

метки и перемешивают.

 

В  мерную  колбу  вместимостью  1000  мл  вносят  720  мл  раствора  1, 

прибавляют  280  мл  раствора  2  и  перемешивают.  Затем  в  мерную  колбу 

вместимостью 1000 мл помещают 100 мл приготовленного 0,1 М фосфатного 

буферного  раствора  доводят  объём  раствора  водой  очищенной  до  метки, 

перемешивают, прибавляют 8,5 г натрия хлорида и вновь перемешивают. рН 

полученного раствора должен быть 7,2 

±

 0,02

. Если показатель рН выше или 

ниже  требуемого,  его  соответственно  доводят  1  М  раствором 

хлористоводородной кислоты или 1 М раствором натрия гидроксида.

 

Приготовление раствора Альсевера

 

Состав

:  

 

2,05 % глюкозы;

 

 

0,42 % натрия хлорида;

 

 

0,8 % натрия цитрата;

 

 

100,0 мл воды очищенной

5408