background image

Определение  проводят  на  6

-

7  суто

чных

 

РКЭ

 

со  скорлупой  белого  цвета. 

Для испытания используют 2 ампулы с вакциной

восстановленной

 

в 5 мл

 

фос-

фатного  забуференного  физиологического  раствора  рН

  (7,0±0,2). 

Полученная 

суспензия содержит живой компонент вакцины в разведении 

10

-1

 

(учитывается 

доза розлива вакцины 0,5 мл и её исходное разведение по возбудителю в среде 
высушивания 1:2). Далее готовят

 

ряд последовательных

 

десятикратных

 

разве-

дений

 

вакцины от 10

-2

 

до 10

-11

Разведения вакцины

  10

-7

-10

-11

являющиеся ра-

бочими  для  данного  испытания,  вводят  в  полость  желточного  мешка  РКЭ

 

в 

объеме 0,5 мл.

 

На каждое разведение вакцины используют по 10 куриных эм-

брионов,

 

которые после введения вакцины инкубируют при температуре 35

-37 

о

С и относительной  влажности воздуха 40

-

60  %  в  течение  13  сут.  Эмбрионы,

 

погибшие

 

с 5 по 13 сут,

 

вскрывают в день гибели

оставшиеся живыми 

– 

на 13 

сут. С помощью стерильных анатомических пинцетов из каждого эмбриона из-
влекают  кусочек 

оболочки  желточного

 

мешка,  который  после  промывания  в 

фосфатном  забуференном  физиологическом  растворе

  (p

Н 

7,0±0,2) 

тщательно 

растирают

 

на хорошо обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на 

воздухе,

 

фиксируют смесью Никифорова

состоящей из равных объемов спирта 

этилового и эфира диэтилового и окрашивают по методу Романовского

-

Гимзы

.  

Примечания

 

Окраска по методу Романовского

-

Гимзы.

 

Приготовление фосфатно

-

буферного раствора

 

(ФБС

): 

ФБС

 

готовят в со-

ответствии с инструкцией по применению красителя Азур 

– 

Эозин по Романов-

скому (в растворе). Для

 

приготовления ФБС допускается использование гото-

вых наборов «Фосфатный буфер» с рН 6,8 

– 

7,2. Полученный раствор исполь-

зуют для разведения красителя и промывки стекол.

 

Фосфатный буферный рас-

твор хранят в плотно закрытом флаконе при температуре 2 

–  8 

0

С в течение 3 

мес, при комнатной температуре 

не более 1 мес.

 

Приготовление

 

рабочего раствора красителя

Смешивают краситель Азур 

Эозин  с  буферным  раствором  в  соотношении  1:5 

1:10  и  фильтруют

 

через 

двойной  бумажный  фильтр.  Степень  разбавления  красителя  устанавливают 

опытным  путем.  Рабочий  раствор  красителя

 

готовят

 

непосредственно  перед 

окраской мазков

хранят при комнатной температуре в течение 6 

8 ч.

 

Краситель

 

Азур

-

Эозин по Романовскому (сухой).

 

При отсутствии готово-

го красителя Азур 

– 

Эозин по Романовскому в растворе

допускается приготов-

ление  раствора  красителя  из  Азур

  - 

Эозин  по  Романовскому  сухого  (далее 

5606