background image

3.

 

МИДэ  (минимальная  инфицирующая  доза  риккетсий  для  развиваю-

щихся куриных эмбрионов) должна соответствовать разведению вакцины 10

-6

 

-

 

10

-8

, что определяет содержание в одной прививочной дозе вакцины от

 

1000 до 

100000  МИДэ.  Определение  проводят

 

биологическим  и  бактериоскопическим 

методом.

  

Определение МИДэ проводят на 6 

7 суточных интактных РКЭ, которым в 

полость желточного мешка вводят вакцину в разведениях от 10

-3

 

до 10

-8

 

в объе-

ме 0,5 мл. Для испытания используют 2 образца (ампулы) вакцины. Содержи-
мое  каждой  ампулы  растворяют  в  5  мл  стерильной  20  %  молочно

-

буферной 

изотонической  смеси  (МБС)  и  объединяют.  Полученная  суспензия  содержит 
живой компонент вакцины в разведении 10

-3

. Далее готовят ряд последователь-

ных  десятикратных  разведений  от  10

-4

 

до  10

-8

.  Каждым  разведением  вакцины 

заражают по 10 РКЭ, которые после введения вакцины инкубируют при темпе-
ратуре 34 

-  36 

о 

С и относительной влажности воздуха 40 

60 % в течение 13 

сут. Эмбрионы, погибшие с 5 по 13 сут, вскрывают в день гибели, оставшиеся 
живыми 

на 13 сут. С помощью стерильного анатомического пинцета из каж-

дого эмбриона извлекают кусочек желточной оболочки, который после промы-
вания в стерильном 0,9 % растворе натрия хлорида рН 6,8

-

7,2 тщательно расти-

рают  на  обезжиренном  предметном  стекле.    Мазки  высушивают  на  воздухе, 
фиксируют смесью Никифорова, состоящей из равных объемов спирта этило-
вого и эфира диэтилового, затем окрашивают по методу Романовского 

– 

Гимза. 

 

Примечания

 

Окраска по методу Романовского 

– 

Гимза. 

 

1.Краситель Азур

-

Эозин по Романовскому (в растворе)

 

Приготовление фосфатно

-

буферного раствора (ФБР).

 

Приготовление ФБР 

осуществляют в

 

соответствии с инструкцией по применению красителя Азур 

Эозин по Романовскому (в растворе). Для приготовления ФБС допускается ис-

пользование  готовых  наборов  «Фосфатный  буфер»  с  рН  6,8

-

7,2.  Раствор  ис-

пользуют для разведения красителя и промывки стекол. Фосфатный буферный 

раствор хранят в плотно закрытом флаконе при температуре 2 

– 8 

С в течение 

трех мес, при комнатной температуре 

не более одного мес. 

 

Приготовление  раствора  красителя.

 

Непосредственно  перед  окраской 

мазков готовят раствор красителя: смешивают краситель Азур 

Эозин с фос-

фатно

-

буферным раствором в соотношении 1:5 

– 

1:20 и фильтруют через двой-

5619