background image

𝑉𝑉

𝑒𝑒

=

𝑉𝑉

𝑒𝑒

(

мл

)

𝑉𝑉

𝑡𝑡

(

мм

)

𝑉𝑉

𝑡𝑡

(

мл

)

.

 

Пики,  элюирующиеся  до  и  после 

K

d

 

=  0,25  (значение

 

V

е

 

на

 

хромато-

грамме, мм), интегрируют вручную. 

 

Содержание  полисахарида

 

(А)

 

в  процентах

 

в  субстанции  вакцины, 

элюированного

 

до 

Kd = 0,25, 

вычисляют

 

по формуле:

 

𝐴𝐴

=

𝑆𝑆

1

(

𝑆𝑆

1

+

𝑆𝑆

2

)

100 %,

 

где

S

1

 – 

площадь пика, элюировавшегося до К

d = 0,25;  

S

2

 – 

суммарная площадь пиков, элюировавшихся

 

до и после К

d

 = 0,25. 

Определение молекулярных параметров можно проводить с помощью 

валидированного  метода  эксклюзионной

 

высокоэффективной  жидкостной

 

хроматографии  (ВЭЖХ)  в  соответствии  с  ОФС  «Высокоэффективная  жид-
костная хроматография» раздел «Эксклюзионная хроматография».

 

Примечания

 

1.

 

Приготовление испытуемого

 

раствора

Растворяют

 0,9 ± 

0,050 мг 

полисахарида  в  0,5  мл

  0,2 

М  раствора  натрия  хлорида.  Полученный

 

раствор

 

перемешивают на шейкере в течение 2 мин. Раствор готовят непосредственно 

перед использованием.

 

2.

 

Приготовление  0,

%  раствора

 

натрия  азида

Растворяют

 

1  мг 

натрия азида в 1мл 0,2М раствора натрия хлорида. Раствор

 

перемешивают

 

на 

шейкере в течение 1 мин.

 

Раствор готовят непосредственно перед использо-

ванием.

 

3.

 

Приготовление  0,5

 

%  раствора  голубого  декстрана.

 

Растворяют

 

0,5 

мг голубого декстрана в 0,5 мл 0,2

 

М раствора натрия хлорида

переме-

шивают  на  шейкере  в  течение  1  мин

прибавляют  40  мкл  0,1

  % 

раствора 

натрия азида и снова

 

перемешивают

 

на шейкере. 

 

Растворы

 

для  калибрования

 

хроматографической  колонки  готовят 

непосредственно перед использованием.

 

4.

 

Приготовление 

0,2 

М раствора

 

натрия хлорида

В мерную колбу 

вместимостью 1000 мл

 

помещают 500

 

мл воды

 

очищенной, прибавляют 11,7 

г

 

натрия хлорида

доводят объём раствора водой до метки

Раствор переме-

шивают на магнитной мешалке в течение 5 мин и

 

хранят при температуре 4 

– 

8 °

С

 

в течение

 

1 мес.

 

 

Специфическая  активность

.

 

Содержание  Ви

-

антигена  в  субстанции 

должно быть от 70 до 130 %. Испытания проводят

 

методом ракетного имму-

5267