background image

рез  колонку  длиной  около  0,4  м  с  внутренним  диаметром  9  мм,  уравнове-
шенную  0,2  М  раствором  натрия  хлорида

пропускают  около  0,9  мг  ПС

 

в 

объеме 0,5 мл раствора 0,2 М натрия хлорида и элюируют со скоростью око-
ло 14 мл/ч. Фракции регистрируют при помощи ультрафиолетового детекто-
ра при длине волны 206 нм. Выход ПС

 

оценивают по площади пиков до и по-

сле К

d = 0,5. 

Калибрование колонки.

 

Определяют полный (

V

t

) и свободный (

V

o

) объ-

емы колонки  с помощью калибровочных растворов 

– 

голубого декстрана и 

натрия азида в условиях, описанных выше.

 

Вычисление объема колонки 

V

е

, соответствующего К

= 0,5, проводят 

по формуле:

 

V

е

 = 

V

о

 + 0,5 (

V

t

 – 

V

о

), 

где

:   

V

о 

– 

свободный

 

объем

 

колонки

 (

объем

 

элюции

  

голубого декстра-

на)

мл;

 

V

t

 – 

общий объем колонки с гелем (объем элюции натрия азида), мл;

 

0,5 – 

значение коэффициента распределения вещества (К

d

) на колонке.

 

Пересчитывают значение 

V

е

 

в мм находят на хроматограмме и рассчи-

тывают по формуле

.

)

(

)

(

)

(

)

(

мл

V

мм

V

мл

V

мм

V

t

t

e

e

=

 

Пики, элюирующиеся до и после 

Kd 

= 0,5 (значение  

V

е 

на

  

хромато-

грамме, мм), интегрируют вручную. 

 

Содержание ПС

  (

А

) в субстанции вакцины, элюировавшегося до 

Kd  = 

0,5, выраженное в процентах, определяют по формуле:

 

%,

100

)

(

2

1

1

+

=

S

S

S

A

 

где

S

1

 – 

площадь пика, элюировавшегося до К

d = 0,5;  

S

2

 – 

суммарная площадь пиков, элюировавшихся  до и после К

d = 0,5. 

 

Примечания

  

1.

 

Приготовление испытуемого раствора

 

Растворяют 

(0,9  ±  0,050) 

мг субстанции  в 0,5 мл  0,2 М раствора натрия хлорида. Полученный раствор 

5278