background image

исходной  концентрации  взвеси  клеток  с  помощью  камеры  Горяева  с 
помощью светового микроскопа суспензию клеток разводят до концентрации 
(1,5–2)

10

6

 клеток/мл. 

Далее готовят суспензию испытуемого штамма с концентрацией 2

10

9

 

КОЕ/мл.  

В ходе испытания 0,5 мл взвеси эпителиальных клеток смешивают с 0,5 

мл  взвеси  бактериальной  культуры  указанной  концентрации.  Клеточно-
бактериальную смесь инкубируют в термостате при температуре (37 ± 1) °С в 
течение  30  мин,  периодически  встряхивая.  Потом  смесь  трехкратно 
отмывают  ЗФР  от  неприлипших  микробов  при  600  об/мин  по  10  мин.  Все 
манипуляции осуществляют на холоде. К осадку добавляют 1–  капли ЗФР и 
готовят  мазки  на  стекле.  Препараты  фиксируют  смесью  Никифорова  и 
окрашивают по Романовскому-Гимзе. 

В  световом  микроскопе  подсчитывают  среднее  количество  бактерий, 

прилипших к 25 эпителиоцитам. 

При  оценке  адгезивности  каждого  штамма  микроорганизма  опыт 

повторяют  не  менее  3  раз.  Подсчитывают  СПА 

  число  микробов, 

адгезированных  к  1  клетке-эпителиоциту,  подсчитывая  среднее  количество 
«микроб/клетка»  в  10  полях  зрения  и  учитывая  результаты  всех  опытов 
(учитывается не менее 25 эпителиоцитов в 10 полях зрения). 

Степень адгезии отдельных штаммов бактерий определяют следующим 

образом: неадгезивные штаммы (СПА = 0); слабоадгезивные (СПА = 1 – 5); 
среднеадгезивные (СПА = 5 – 10) и высокоадгезивные (СПА выше 10). 

Штаммы с высокой адгезивной активностью не следует рекомендовать 

для производства пробиотиков. 

Раздел 4. Определение безопасности пробиотических штаммов 

Определение  вирулентности,  токсичности,  токсигенности  и 

безвредности  осуществляют  в  соответствии  с  ОФС  «Безопасность 
пробиотиков в опытах 

in vivo

».  

2888