background image

градиентного  элюирования,  в  процессе  которого  для  каждого  белка 
создаются условия быстрой десорбции.  

Градиентное элюирование

 

Величина  среднего  фактора  ёмкости  (

k

),  характеризующего 

удерживание  сорбента  в  условиях  градиентного  элюирования,  прямо 
пропорциональна 

продолжительности 

градиента 

и 

обратно 

пропорциональна  разнице  в  содержании  органического  растворителя  в 
начальной 

и 

конечной 

точках 

градиента. 

Для 

получения 

удовлетворительных значений 

(1 ≤ 

 

10) для молекул белков цитокинов 

и интерферонов необходимо использовать разделение с продолжительным 
временем градиента и, по возможности, с меньшей разницей в содержании 
органического растворителя в начальной и конечной точках градиента. Как 
правило,  продолжительность  градиента  в  большинстве  методик  анализа 
цитокинов и интерферонов не превышает 60 мин.  

Другим  важным  параметром  является  крутизна  градиента  – 

изменение  процентного  содержания  ацетонитрила  в  подвижной  фазе  в 
единицу  времени.  В  связи  с  тем,  что  в  препаратах  цитокинов  и 
интерферонов наряду с основным действующим веществом содержатся, как 
правило,  близкородственные  примеси,  нужно  задавать  необходимую 
пологую  форму  градиента  (≈  1  %  в  мин),  которая  позволяет  обеспечить 
достаточно четкое разрешение пиков для определения чистоты препарата. 

Выбор  подвижной  фазы. 

В  обращённофазной  хроматографии 

подвижная  фаза  состоит  из  буферного  раствора  и  органического 
растворителя.  При  разделении  белков  и  пептидов  в  состав  растворов 
подвижной  фазы,  как  правило,  входят  разбавленные  растворы  кислот: 
фосфорной, 

трифторуксусной, 

муравьиной, 

уксусной 

или 

гептафтормасляной.  

В  качестве органического компонента подвижной  фазы при анализе 

белков  и  пептидов  методом  ОФ  ВЭЖХ  наиболее  часто  используется 
ацетонитрил, обладающий низкой вязкостью и низким поглощением в УФ 

2913