Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

использовании метода для оценки чистоты, количество наносимого образца
должно обеспечивать выявление 1 % примеси). Для калибровки геля наносят
растворы белков (маркеры) с известными величинами изоэлектрических
точек (коммерческие наборы маркеров с диапазоном изоэлектрических точек
3

−

10; 2,5

−

6,5; 5

−

10,5 или с маркерами, указанными в фармакопейных

статьях). Вместо бумажных аппликаторных полосок возможно
использование геля с лунками для проб.

Держатель электродов помещают в электрофоретическую камеру и

устанавливают  электроды  вдоль  центров  электродных  полосок  на
поверхности  геля.  Соединяют  электроды  с  основной  частью  камеры  и
закрывают  ее  крышкой.  Подключают  камеру  к  источнику  питания  (тока).
Условия  изоэлектрического  фокусирования  указывают  в  фармакопейной
статье или нормативной документации.

После окончания электрофореза отключают источник питания,

снимают  крышку  прибора,  убирают  электроды.  Аккуратно,  пинцетом
удаляют  электродные  полоски  и  аппликаторы  с  геля.  Гель  немедленно
переносят  в  емкость  с  фиксирующим  раствором  и  выдерживают  при
покачивании,  затем  фиксирующий  раствор  удаляют.  Гель  промывают
трижды  деионизованной  водой,  прибавляют  окрашивающий  раствор
Кумасси  R-250  или  G-250,  состав  и  приготовление  которых  указывают  в
фармакопейной  статье  или  нормативной  документации.  При  окраске
Кумасси  R-250  гель  отмывают  в  25  %  растворе  этанола  и  8  %  растворе
уксусной  кислоты,  а  при  окраске  Кумасси  G-250  –  в  деионизованной  воде.
Отмывку  проводят  до  тех  пор,  пока  на  прозрачном  фоне  не  станут  четко
видны полосы после изоэлектрофокусирования.

Для окраски геля возможно применение раствора серебра нитрата,

приготовление которого, а также условия отмывания, описывают в
фармакопейной статье или нормативной документации.