Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

−

использование различного количества наносимых на гель проб;

−

изменение условий переноса белков с геля на мембрану, включая

изменение используемого оборудования;

−

изменения состава буферных растворов;

−

изменение способа детекции исследуемого вещества.

Примечания
Буферный раствор для переноса белков рН 8,3. Если нет иных

указаний в фармакопейной статье или нормативной документации,

используют один из описанных ниже способов приготовления растворов

(см. Вариант 1 и Вариант 2). Раствор для переноса можно использовать 2-

3 раза. Раствор хранят в течение 6 мес при температуре от 4 до 8

С.

Вариант 1.

В градуированный химический стакан вместимостью 3000

мл помещают 7,86 г трис(гидроксиметил)аминометана, 33,75 г глицина,

добавляют до 2400,0 мл деионизованной воды и перемешивают на

магнитной мешалке до полного растворения. Измеряют рН, который

должен быть равен 8,3 – 8,4 (доводить рН раствора кислотой или щелочью

не допускается). Добавляют 600,0 мл спирта и перемешивают.

Вариант 2.

В градуированный химический стакан вместимостью 1000

мл помещают 5,8 г трис(гидроксиметил)аминометана, 2,9 г глицина, 11,55

мл 10 % раствора натрия додецилсульфата, добавляют 800,0 мл

деионизованной воды и перемешивают на магнитной мешалке до полного

растворения, измеряют pH (8,3-8,4). Добавляют 200,0 мл 100 % метанола и

перемешивают. Если используется PVDF-мембрана, то натрия

додецилсульфат из буферного раствора исключают, а количество спирта

уменьшают до 100,0 мл, увеличивая тем самым объем добавляемой воды

до 900,0 мл.

Фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ), рН 7,2 (если нет других

указаний в фармакопейной статье или нормативной документации). В

градуированную емкость наливают 4500,0 мл деионизованной воды и

последовательно прибавляют: 40,0 г натрия хлорида, 1,0 г калия хлорида

5,75 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 2х-водного, 1,0 г калия

фосфорнокислого однозамещенного (каждую следующую соль

прибавляют после полного растворения предыдущей). Устанавливают рН

до 7,2 раствором 70 % ортофосфорной кислоты или раствором 45% натрия

гидроксида. Доводят объем до 5000,0 мл деионизованной водой. Раствор

фильтруют и хранят в течение 3 мес при температуре 4 - 8

С.

Буферный раствор для отмывки. В мерную колбу вместимостью 1000

мл вносят 5,0 мл 10 % раствора твин-20, доводят объем раствора до метки