Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Тандемная масс-спектроскопия также используется для определения

последовательности модифицированных белков и для определения типа
произошедшей аминокислотной модификации.

Идентификация полученных фрагментов может быть осуществлена с

помощью современных компьютерных баз данных.

Определение расположения дисульфидных связей в различных

сульфгидрил-содержащих пептидах может быть произведено методом
сравнения масс-спектров продукта расщепления до и после восстановления.

Если некоторые части первичной структуры не могут быть достаточно

четко  отражены  пептидной  картой,  может  потребоваться  составление
вторичной  пептидной  карты.  Получение  вторичной  пептидной  карты
заключается в выделении полученных при гидролизе пептидных фрагментов
с  последующим  их  вторым  расщеплением  в  выбранных  условиях,
хроматографическим  разделением,  обнаружением  и  идентификацией.
Выделение пептидных фрагментов после первого гидролиза проводится, как
правило,  методами  колоночной  хроматографии.  Условия  гидролиза,
разделения  и  идентификации  при  получении  вторичной  пептидной  карты
отличаются от условий получения первичной пептидной карты.

Для каждого из белков характерна совокупность уникальных свойств,

обусловленных  его  первичной  структурой  и  структурами  более  высокого
порядка.  Пики  пептидных  фрагментов  наиболее  характерных  для  данного
пептида и/или отражающих наиболее важные свойства испытуемого пептида,
например,  комплимент  зависимую  область,  выбираются  в  качестве
характерных  (реперных)  пиков.  Выбор  реперных  пиков  должен  быть
обоснован,  а  перечень  реперных  пиков  приводится  в  нормативной
документации.

Валидация.

Методики

пептидного

картирования

подлежат

валидации.

Характеристики, подлежащие валидации определяются критическими
параметрами испытания, влияющими на интерпретацию результатов и их