background image

Измеряют  оптическую  плотность  надосадочной  жидкости  на 

спектрофотометре  в  кюветах  с  толщиной  слоя  10  мм  при  длине  волны 
541 нм. Раствор сравнения – буферный раствор. 

Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3): 

𝑌

=

Aп−Ao
Aк−Ao

,   

где: Ап – среднее значение оптической плотности испытуемой пробы; 

Ао  –  среднее  значение  оптической  плотности  контрольной  пробы 

без гемолиза;  

Ак – среднее значение оптической плотности контрольной пробы с 

полным гемолизом. 

 

С помощью программного обеспечения или на миллиметровой бумаге 

с логарифмическим масштабом строят график со значениями Y/(1-Y) по оси 
абсцисс  и  количеством  разведенного  комплемента  (в  мл)  по  оси  ординат. 
Получают  оптимизированную  кривую  (при  построении  графика 
учитываются значения степени гемолиза, находящиеся в диапазоне от 0,15 до 
0,85;  значения,  находящиеся  за  пределами  указанного  диапазона  не 
учитываются),  соответствующую  нанесенным  точкам,  и  определяют 
ординату для дозы комплемента, приводящей к 50% гемолизу, т.е. Y/(1-Y)=1. 

Вычисляют  активность  комплемента  в  исходном  растворе, 

выраженную в гемолитических единицах (СН

50

/мл), по формуле (4): 

СН

50

/мл = 

В

С∙5

 

,   

где:  В – величина, обратная степени разведения комплемента;  

С – объем разведенного комплемента (мл);  

вызывающий 50% гемолиз (Y/(1-Y)=1); 

5 – множитель для учета количества эритроцитов. 

 

Результат титрования комплемента считают достоверным при условии, 

что наклон прямой составляет от 0,15 до 0,40, предпочтительно в интервале 
0,18-0,30. 

 

3176