Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

–

подсчет клеток производить с объективом 8× (10×), реже 40×. С
иммерсионным объективом работать нельзя.

Подсчет клеток на мембранных фильтрах

Этот метод рекомендуется использовать для определения количества

микроорганизмов во взвесях с низкой концентрацией клеток.

Определенный объем исследуемой суспензии фильтруют через

мембранный  фильтр  с  нанесенной  сеткой.  Размер  пор  фильтра  0,22  или
0,45 мкм.  Затем  микроорганизмы  на  фильтре  окрашивают  карболовым
эритрозином  и  подсчитывают  в  20  полях  зрения  с  помощью  микроскопа,
оснащенного  окулярным  микрометром.  Расчет  общего  количества
микроорганизмов (

) в 1 мл производят по формуле:

𝑥

𝑆∙𝑁∙10

𝑠∙𝑉

’

где: S –фильтрующая площадь (мм

);

– переводной коэффициент квадратных миллиметров в квадратные

микрометры;

N – среднее количество бактерий в одном квадрате;
s – площадь квадрата окулярного микрометра, мкм

;

V– объем профильтрованной жидкости, мл.
При подсчете клеток на мембранных фильтрах с помощью

люминесцентного  микроскопа  используют  нелюминесцирующие  фильтры.
После  концентрирования  клеток  на  их  поверхности  проводят
флюорохромирование акридиновым оранжевым и подсчитывают. Этот метод
позволяет  подсчитать  общее  количество  микроорганизмов  и  определить
среди  них  количество  жизнеспособных  клеток,  так  как  при  окрашивании
акридиновыми  красителями  жизнеспособные  клетки  имеют  зеленую,  а
нежизнеспособные

−

красную окраску.

Методы непрямого определения концентрации клеток микроорганизмов

К непрямым методам определения концентрации клеток