background image

получения  не  менее  чем  пяти  стандартных  растворов,  имеющих 
концентрации  белка,  равномерно  распределенные  в  интервале  между    5

 

мкг/мл и 100 мкг/мл. 

Испытуемый  раствор

.  Готовят  раствор  испытуемого  лекарственного 

средства  в  буферном  растворе,  указанном  в  фармакопейной  статье,  с 
концентрацией  белка,  находящейся  в  пределах  интервала  концентраций 
калибровочного графика. 

Контрольный  раствор.

  Используют  буферный  раствор,  применяемый 

для приготовления стандартных и испытуемого растворов. 

Метод А (без предварительного осаждения белка)

.

 К 1,0 мл каждого 

из  стандартных  растворов,  испытуемого  раствора  и  к  1,0  мл  контрольного 
раствора,  прибавляют  по  5,0  мл  реактива  В.  Содержимое  пробирок 
перемешивают  и  оставляют  на  10 

  30  мин  при  комнатной  температуре. 

Затем  в  каждую  пробирку  прибавляют  0,5  мл  реактива  Фолина, 
разбавленного  перед  употреблением  водой  в  2  раза,  быстро  и  тщательно 
перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Измеряют 
оптическую  плотность  испытуемого  и  стандартных  растворов  на 
спектрофотометре при длине волны 750 нм (или указанной в фармакопейной 
статье),  используя  контрольный  раствор  в  качестве  раствора  сравнения. 
Окраска остается стабильной в течение 2 часов. Допускается использование 
коммерческого реактива Фолина-Чокалтеу. 

Зависимость  оптической  плотности  от  концентрации  белка  носит 

нелинейный  характер,  тем  не  менее,  если  интервал  концентраций, 
используемых  для  построения  калибровочного  графика,  небольшой,  то  она 
приближается  к  линейной.  Строят  зависимости  оптических  плотностей 
стандартных  растворов  от  концентраций  белка  и  используют  линейную 
регрессию  для  построения  калибровочной  кривой.  На  основании 
калибровочной  кривой  и  оптической  плотности  испытуемого  раствора 
определяют концентрацию белка в испытуемом растворе. 

1030