Обнаружение белков в гелях

буферном растворе для образцов в соотношении, указанном в
фармакопейной статье или нормативной документации.

Обычно для обеспечения полной денатурации образец в смеси с

буферным раствором подвергают дополнительно температурной обработке,
режим которой должен быть указан в фармакопейной статье или
нормативной документации.

Наносят соответствующие объемы каждого из растворов в лунки

концентрирующего геля. Начинают электрофорез, используя условия,
рекомендуемые изготовителем оборудования.

Изготовители оборудования для SDS-ПААГ могут обеспечивать

применение гелей различной площади и толщины. Соответственно
продолжительность электрофореза и сила тока (или напряжение) могут быть
изменены, как описано изготовителем прибора, чтобы достичь оптимального
разделения, что проверяют по скорости перемещения фронта индикатора в
разделяющем геле.

Когда индикатор достигает основания геля, электрофорез

останавливают. Удаляют ячейку с гелем из прибора и отделяют стеклянные
пластины. Удаляют прокладки, отрезают и удаляют концентрирующий гель и
немедленно проводят процедуру окрашивания. Для того, чтобы можно было
выявить присутствие в исследуемом образце агрегатов и других
компонентов, не входящих в гель, концентрирующий гель рекомендуется
обрезать не полностью, оставляя 2–3 мм.

Так называемые, «готовые к использованию» коммерческие гели и

наборы реактивов к ним могут быть применены при условии, что они дают
результаты, отвечающие валидационным критериям, приведенным ниже в
разделе «Оценка пригодности системы».

Обнаружение белков в гелях

Окрашивание

Кумасси

бриллиантовым

R250

–

наиболее

распространенный метод окрашивания белков с пределом обнаружения
порядка от 1 до 10 мкг белка в полосе. Окрашивание нитратом серебра –