Определение молекулярных масс белков

высушивания. Аккуратно помещают пропитанный в глицериновом растворе
гель  на  натянутую  целлюлозную  пленку.  Удаляют  все  случайно  попавшие
воздушные пузыри,  и  заливают  вокруг  граней  геля  несколько  миллилитров
воды. Помещают второй лист пленки сверху и снова удаляют все воздушные
пузыри.  Заканчивают  сборку  рамки  для  сушки  геля  и  помещают  ее  в
сушильный  шкаф  или  оставляют  при  комнатной  температуре  до  полного
высыхания.

Определение молекулярных масс белков

Молекулярные массы белков определяют по сравнению их

подвижностей  с  подвижностью  нескольких  белков-маркеров  известной
молекулярной  массы.  Готовые  смеси  белков  с  точно  известными
молекулярными  массами  (маркеры)  для  калибрования  гелей  предлагаются
производителями материалов и оборудования для электрофореза в различных
диапазонах  молекулярных  масс.  Концентрированные  исходные  растворы
полипептидов  известной  молекулярной  массы  готовят  в  соответствующем
буферном растворе для образцов и наносят на гель одновременно с образцом
испытуемого белка.

Сразу после того, как электрофорез завершен, следует отметить

положение полосы красителя бромфенолового синего, которая соответствует
электрофоретическому ионному фронту. Это может быть сделано при
помощи меток-надрезов в геле или путем прокола геля в зоне окрашенного
фронта иглой, предварительно обмакнутой в черную тушь или другой
подходящий контрастный краситель.

После окрашивания геля измеряют расстояния пробега для каждой

полосы белка (маркеров и испытуемого образца) от вершины разделяющего
геля. Вычисляют отношение расстояния пробега каждого белка к расстоянию
пробега фронта красителя. Нормализованные расстояния пробега,
вычисленные таким образом, называются относительными подвижностями
белков (относительно фронта красителя) и обозначаются как