Жидкофазный гидролиз

Гидролизующий раствор

. К 6 М хлороводородной кислоте, содержащей

0,2 % фенола, прибавляют натрия азид до получения конечной концентрации
2 г/л. Прибавление фенола предотвращает галогенирование тирозина.

Жидкофазный гидролиз

. Гидролиз белка/пептида проводят при

температуре  около  110 °С  в  течение  24 ч.  Во  время  гидролиза
присутствующий  в  образце  цистеин/цистин  превращается  в  цистеиновую
кислоту  под  воздействием  натрия  азида,  содержащегося  в  гидролизном
растворе.  Эта  методика  приводит  к  получению  лучших  значений
открываемости,  рассчитанных  для  тирозина,  чем  Метод 4,  но  не  подходит
для  количественного  определения  метионина.  Метионин  превращается  в
смесь  из  исходного  метионина  и  двух  продуктов  его  окисления  –
метионинсульфоксида и метионинсульфона.

МЕТОД 6

Окисление

цистеина/цистина

происходит

под

воздействием

диметилсульфоксида.

Гидролизующий раствор

. К 6 М хлористоводородной кислоте, содержащей

от 0,1 % до 1,0 % фенола, прибавляют диметилсульфоксид до получения
раствора с конечной концентрацией 2 % (об/об).

Парофазный гидролиз

. Гидролиз белка/пептида проводят при

температуре  около  110 °С  в  течение  24 ч.  Во  время  гидролиза
присутствующий  в  образце  цистеин/цистин  превращается  в  цистеиновую
кислоту  под  воздействием  диметилсульфоксида,  содержащегося  в
гидролизном  растворе.  С  целью  ограничения  разброса  получаемых
результатов  и  учета  частичного  разрушения  рекомендуется  оценивать
значение  открываемости,  рассчитанное  для  цистеиновой  кислоты  после
окислительного  гидролиза  стандартного  образца  белка,  содержащего  1–8
остатков цистеина. Фактор отклика для цистеиновой кислоты в гидролизате
белка/пептида  обычно  на  30 %  ниже,  чем  для  негидролизованного
стандартного  образца  цистеиновой  кислоты.  Так  как  гистидин,  метионин,