background image

тиольных соединений, таких как N-ацетил-L-цистеин или 2-меркаптоэтанол. 
Длительное воздействие натрия гипохлорита или хлорамина Т не оказывает 
заметного влияния на дериватизацию первичных аминокислот. 

Разделение  аминокислот  на  ионообменной  колонке  достигается 

подбором  рН  и  ионной  силы.  После  пост-колоночной  дериватизации 
элюируемых  аминокислот  с  ОФА  продукты  реакции  проходят  через 
флуориметрический  детектор.  Интенсивность  флуоресценции  ОФА-
производных аминокислот измеряется при длине волны возбуждения 348 нм 
и длине волны эмиссии 450 нм. 

Предел обнаружения для большинства ОФА-производных аминокислот 

обычно  составляет  несколько  десятков  пмоль.  Линейность  сигнала 
наблюдается в области от нескольких пмоль до нескольких десятков нмоль. 
Для получения удовлетворительных результатов рекомендуется использовать 
для гидролиза образцы белка/пептида массой более 500 нг. 

 

МЕТОД 3.  Предколоночная  дериватизация  с  фенилизотиоционатом 
(ФИТЦ) 

Фенилизотиоцианат  (ФИТЦ)  реагирует  с  аминокислотами  с 

образованием  фенилтиокарбамильных  (ФТК)  производных,  которые 
детектируются с высокой чувствительностью при длине волны 254 нм. 

После  удаления  реактива  под  вакуумом  ФТК-производные 

аминокислот могут храниться в сухом состоянии в морозильнике в течение 
нескольких  недель  без  заметной  деградации.  Готовый  раствор  пробы  для 
анализа  может  храниться  в  течение  3  дней  в  холодильнике  без  заметных 
изменений хроматографического сигнала. 

Разделение  ФТК-производных  аминокислот  методом  обращенно-

фазовой ВЭЖХ на колонке, заполненной октадецилсиликагелем, достигается 
путем подбора концентрации ацетонитрила в подвижной фазе и ионной силы 
буферного  раствора.  Элюируемые  из  колонки  ФТК-производные 
аминокислот детектируются при длине волны 254 нм. 

Предыдущая <  | 695  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF