V
i
– объем элюирования
i
-ой части пика декстрана на
хроматограммах каждого из калибровочных растворов (или
i
-ой части
пика глюкозы на хроматограмме маркерного раствора для определения
рабочего объема колонки).
Аналогичным образом для пиков каждого из калибровочных
декстранов и глюкозы по формуле (1) рассчитывают коэффициент
распределения
K
макс
.
, соответствующий вершине пика. Используя
подходящее программное обеспечение строят зависимость полученных
значений
K
макс.
(ось абсцисс) от заявленной молекулярной массы в
максимуме пика (
M
макс.
) каждого из декстранов, использованных для
калибровки, и глюкозы (ось ординат). Полученную зависимость
аппроксимируют уравнением вида (2). Используя значения
K
i
,
рассчитанные
по уравнению (1) для соответствующих частей пиков калибровочных
декстранов и глюкозы, вычисляют значения
M
i
, а затем, значения
M
w
по
уравнениям (2) и (3).
𝑀
𝑖
=
𝑏
5
+
𝑒
(
𝑏
4
+𝑏
1
𝐾
𝑖
+𝑏
2
𝐾
𝑖
2
+𝑏
3
𝐾
𝑖
3
)
,
(2)
𝑀
w
=
∑
𝑦
𝑖
𝑀
𝑖
𝑝
𝑖=1
∑
𝑦
𝑖
𝑝
𝑖=1
,
(3)
где
p
– число частей, на которые поделен хроматографический пик;
y
i
– высота
i
-ой
части пика над базовой линией;
M
i
– молекулярная масса
i
-ой
части пика;
𝑀
w
– расчетное значение среднемассовой молекулярной массы.
Рассчитанные значения
𝑀
w
для калибровочных декстранов и глюкозы
сравнивают с паспортными значениями. При необходимости, используя
подходящие программное обеспечение и алгоритм аппроксимации
калибровочной кривой нелинейным методом наименьших квадратов
(например, методом Гаусса-Ньютона), выполняют итерационный подбор
коэффициентов
b
1
–b
5
в уравнении (2), добиваясь выполнения условий
пригодности калибровки (см. раздел «Проверка пригодности системы и
калибровки»).
Предыдущая < | 725 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF