Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 4

МИДэ (минимальная инфицирующая доза риккетсий для развиваю-

щихся куриных эмбрионов) должна соответствовать разведению вакцины 10

-6

-8

, что определяет содержание в одной прививочной дозе вакцины от

1000 до

100000 МИДэ. Определение проводят

биологическим и бактериоскопическим

методом.

Определение МИДэ проводят на 6

7 суточных интактных РКЭ, которым в

полость желточного мешка вводят вакцину в разведениях от 10

-3

до 10

-8

в объе-

ме 0,5 мл. Для испытания используют 2 образца (ампулы) вакцины. Содержи-
мое каждой ампулы растворяют в 5 мл стерильной 20 % молочно

буферной

изотонической смеси (МБС) и объединяют. Полученная суспензия содержит
живой компонент вакцины в разведении 10

-3

. Далее готовят ряд последователь-

ных десятикратных разведений от 10

-4

до 10

-8

. Каждым разведением вакцины

заражают по 10 РКЭ, которые после введения вакцины инкубируют при темпе-
ратуре 34

- 36

С и относительной влажности воздуха 40

60 % в течение 13

сут. Эмбрионы, погибшие с 5 по 13 сут, вскрывают в день гибели, оставшиеся
живыми

на 13 сут. С помощью стерильного анатомического пинцета из каж-

дого эмбриона извлекают кусочек желточной оболочки, который после промы-
вания в стерильном 0,9 % растворе натрия хлорида рН 6,8

7,2 тщательно расти-

рают на обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе,
фиксируют смесью Никифорова, состоящей из равных объемов спирта этило-
вого и эфира диэтилового, затем окрашивают по методу Романовского

–

Гимза.

Примечания

Окраска по методу Романовского

–

Гимза.

1.Краситель Азур

Эозин по Романовскому (в растворе)

Приготовление фосфатно

буферного раствора (ФБР).

Приготовление ФБР

осуществляют в

соответствии с инструкцией по применению красителя Азур

Эозин по Романовскому (в растворе). Для приготовления ФБС допускается ис-

пользование готовых наборов «Фосфатный буфер» с рН 6,8

7,2. Раствор ис-

пользуют для разведения красителя и промывки стекол. Фосфатный буферный

раствор хранят в плотно закрытом флаконе при температуре 2

– 8

С в течение

трех мес, при комнатной температуре

не более одного мес.

Приготовление раствора красителя.

Непосредственно перед окраской

мазков готовят раствор красителя: смешивают краситель Азур

Эозин с фос-

фатно

буферным раствором в соотношении 1:5

–

1:20 и фильтруют через двой-