кислотой, которое при реакции с реактивом Фолина
-
Чокальтеу
соответствует 1
миллиэквиваленту (мэкв)
тирозина.
Около
25
мг
(точная навеска) субстанции
растворяют в 200 мл
хлористоводородной
кислоты
раствора 0,0025
М
.
2,0 мл полученного
раствора помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл и доводят объём
раствора
0,00
25 М раствором
хлористоводородной кислоты
до метки.
В
контрольную и
3
опытные пробирки вносят по 5 мл
субстрата. В
контрольную пробирку прибавляют
10
мл
трихлоруксусной кислоты
раствора 0,3
М
, 1
мл
приготовленного раствора субстанции
и тщательно
перемешивают. Опытные пробирки и раствор субстанции
нагревают в
водяной бане при 35,5±0,5
°
С
в течение ровно
3
минут.
К содержимому пробирок прибавляют
по 1 мл
раствора субстанции
с
интервалом в 30 сек по секундомеру, тщательно перемешивают и
выдерживают в термостате при той же температуре в течение ровно
10
минут. Затем в каждую пробирку с интервалом в 30 сек по секундомеру
прибавляют
по 10 мл
трихлоруксусной кислоты
раствора 5
%
. После
осаждения белков смесь выдерживают при комнатной температуре 30 минут
,
после чего фильтруют содержимое контрольной и опытных пробирок. В
конические колбы вместимостью
25
мл
вносят по 5 мл
фильтрата, по 10 мл
0,5
М
раствора натрия гидроксида
и затем, при помешивании, по 3
мл
разведённого
реактива
Фолина
-
Чокальтеу. Через 10 минут измеряют
оптическую плотность растворов на спектрофотометре при длине волны
630
нм
в кювете с толщиной слоя 1 см
.
Построение калибровочного графика.
Калибровочный график строят по
стандартному раствору тирозина. Около
14,5
мг
(точная навеска)
чистого
тирозина, растворяют в 100 мл
хлористоводородной
кислоты
раствора 0,2
М
.
Полученный исходный раствор содержит 8∙
10
-4
мэкв
тирозина в 1
мл
.
Для
получения стандартного раствора 10 мл
исходного раствора переносят в
мерную колбу емкостью 50 мл
и доводят объем раствора 0,2 М
раствором
хлористоводородной кислоты
до метки. 5 мл
полученного раствора
Предыдущая < | 4942 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF