где
C
−
содержание тирозина в опытной пробе, мэкв
(среднее
арифметическое из трёх
определений
);
V
−
объём, в котором растворена
субстанция
,
мл
;
a
−
навеска субстанции, мг
.
Примечание.
1.
Приготовление 22 % раствора гемоглобина. 2,2 г сухого
гемоглобина растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 10
мл.
2.
Приготовление раствора
субстрата. К
8,0
мл
1
М
раствора натрия
гидроксида
прибавляют
72,0
мл
воды, 36
,0
г
мочевины и 10
,0
мл
22 %
раствора гемоглобина. Смесь термостатируют в течение 45 ± 15 мин
при
25 °
С, после чего к ней прибавляют
раствор 4 г
мочевины в 10 мл
1
М
раствора калия дигидрофосфата
.
рН полученного раствора должен быть 7,5
-
8,0. Хранят при 5
±3 °
С
не более 10 суток.
2. Амидазная активность.
Не менее 6,0 микрокаталь/мг
.
Метод
основан на определении количества
п
-
нитроанилина, освобождаемого
трипсином из синтетического субстрата
–
гидрохлорида
N
α
-
бензоил
-DL-
аргинин
-
п
-
нитроанилида (БАПНА
,
CAS
911-77-3
). Все растворы
используются свежеприготовленными.
Субстанция имеет активность в 1 микрокаталь, если при её воздействии
на субстрат БАПНА в течение одной секунды
освобождается 1 микромоль
п
-
нитроанилина
.
Раствор п-нитроанилина.
Около 50 мг (точная навеска) нитроанилина
растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в смеси
0,1
М
трис
-
гидрохлорид
буферный
раствор
pH 7,8—
диметилсульфоксид
—
уксусной
кислоты раствор
5
М
96:4:20.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью
100 мл и доводят объем раствора
той же
смесью до метки. Получают раствор
с концентрацией около 5 мкг/мл. При необходимости раствор дополнительно
разбавляют так, чтобы
оптическая плотность при длине волны 405 нм
составляла 0,35 ± 0,15. Измеряют оптическую плотность полученного
раствора при длине волны 405 нм по сравнению со смесью 4,8
мл 0,1 М трис
-
гидрохлорид буферного раствора pH 7,8, 0,2 мл диметилсульфоксида и 1 мл
уксусной кислоты
раствора 5
М
.
Предыдущая < | 4944 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF