Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

мкг/мл.  К  0,05;  0,1;  0,2;  0,3  мл  разведенного  стандартного  образца
прибавляют  воду  до  0,4  мл  (концентрация  БСА  –  0,25;  0,5;  1,0;  1,5  мкг/мл
соответственно). Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс
количество  БСА  в  СО,  в  мкг/мл,  а  по  оси  ординат–высоту  пика  в  мм.
Калибровочный график должен проходить через начало координат.

Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.

Примечания

Испытуемый образец – 15 мкл испытуемого образца.

Получение сыворотки против БСА. Кроликов породы Шиншилла массой

2,5–3,5 кг иммунизируют 0,15 % раствором БСА. Используют БСА с

содержанием белка не менее 95 %.

Приготовление 0,15 % раствора БСА. 0,15 г БСА помещают в

градуированный цилиндр вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл 0,9 %

раствора натрия хлорида, доводят объем раствора тем же растворителем до

метки и перемешивают.

I цикл иммунизации

состоит из 2 инъекций 0,15 % раствора БСА с

интервалом 7 сут в дозе 1,0 мл в смеси с 1,0 мл адъюванта Фрейнда в область

подколенных лимфатических узлов (последовательно в правую и левую

лапу).

II цикл иммунизации

проводят через 30 сут после I цикла: делают 5

внутрибрюшинных инъекций БСА с интервалом 2 сут в возрастающих дозах:

0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 мл (за 1 ч до первой инъекции проводится

десенсибилизация – 0,1 мл 0,15% раствора БСА подкожно).

III цикл иммунизации

проводят через 30 сут после циклаII

иммунизации, и он состоит из 3 внутривенных инъекций с интервалом 2 сут

в возрастающих объемах: 0,5; 1,0; 1,5 мл 0,15 % раствора БСА (за 1 ч до

первой инъекции проводится десенсибилизация – 0,1 мл раствора БСА

подкожно).

Через 7 сут после последнего введения БСА у кроликов берут 2–3 мл

крови и в сыворотке определяют титр антител против БСА методом

ракетного иммуноэлектрофореза (отмечают разведение сыворотки, дающее

пик высотой 1 мм с раствором БСА в концентрации 0,5 мкг/кг). Сыворотка,

имеющая титр не ниже 1:500, годна к дальнейшему использованию в этом

случае кроликов обескровливают тотально.

Если титр сыворотки ниже 1:500, через 30 сут проводят

IV цикл

иммунизации

(аналогичный третьему циклу), через 7 сут кроликов

обескровливают тотально и устанавливают титр антител против БСА.

Сыворотка, имеющая титр ниже 1:500, подлежит уничтожению.

При обескровливании кроликов кровь от каждого из них собирают в

отдельный флакон. Флаконы с кровью ставят в термостат при температуре

(37

1) ºС на 60–65 мин, затем обводят образовавшийся сгусток пипеткой и