Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

ОФС.1.7.2.0022.15

Определение подлинности и чистоты
биологических лекарственных
препаратов методом вестерн-блот

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод

вестерн-блот, один из вариантов иммуноблоттинга, который используют для
оценки  подлинности  и  чистоты  биологических  лекарственных  препаратов
(БЛП)  на  основе  высокоочищенных  белков,  в  том  числе,  полученных  по
технологии рекомбинантной ДНК.

На первом этапе проводят электрофорез в полиакриламидном геле с

натрия  додецилсульфатом  (так  называемый,  SDS-PAGE  электрофорез)  для
разделения белков. Затем белки переносят на нитроцеллюлозную мембрану
или  PVDF-мембрану  (мембрана  из  поливинилденфторида).  Детекцию
проводят  с  помощью  специфичных  к  определяемому  белку  антител,
конъюгированных с щелочной фосфатазой или пероксидазой хрена (прямой
вариант  ИФА)  или  последовательно  с  помощью  первых  антител  к
определяемому белку и вторых антител (так называемой, антиглобулиновой
сыворотки),  специфичных  к  иммуноглобулину  первых  антител,
конъюгированных  с  щелочной  фосфатазой  или  пероксидазой  хрена
(непрямой вариант ИФА).

В данной ОФС изложен метод детекции на основе цветной реакции,

как один из наиболее широко применяемых в настоящее время. Для детекции
также могут быть использованы хемилюминесцентный метод, в том числе, с
усилением хемилюминесценции, и методы радиоактивной или
флуоресцентной меток (РИА или РИФ).