Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Метод ИФА включает 3 основных этапа: 1) образование иммунного

комплекса  «антиген  (исследуемое  вещество)  –  специфическое  к  нему
антитело»  или  наоборот;  2)  формирование  связи  конъюгата  с
образовавшимся  на  предыдущем  этапе  иммунным  комплексом  или  со
свободными  местами  связывания  (детерминантами);  3)  преобразование
субстрата  под  действием  ферментной  метки  в  регистрируемый  сигнал  в
результате биохимической реакции.

Все

методики

выполнения

иммуноферментного

анализа

классифицируются как гомогенные или гетерогенные.

Методики, в которых все 3 стадии ИФА проходят в растворе, и между

основными

стадиями

нет

дополнительных

этапов

разделения

образовавшихся

иммунных

комплексов

от

непрореагировавших

компонентов,  относятся  к  группе  гомогенных  методов  ИФА.  В  основе
гомогенного  ИФА,  применяемого,  как  правило,  для  определения
низкомолекулярных  субстанций,  лежит  процесс  ингибирования  активности
фермента  при  его  соединении  с  антигеном  или  антителом.  В  результате
реакции  антиген–антитело  активность  фермента  восстанавливается.  При
образовании  иммунного  комплекса  антиген–антитело,    содержащего
ферментную метку, происходит ингибирование активности фермента на 95 %
по  отношению  к  высокомолекулярному  субстрату,  что  обусловлено
стерическим исключением субстрата из активного центра фермента. По мере
увеличения  концентрации  антигена  происходит  связывание  все  больше
антител,  и  сохраняется  все  больше  свободных  конъюгатов  «антиген–
фермент»,  способных  гидролизовать  высокомолекулярный  субстрат.
Гомогенный  метод  ИФА  проводится  очень  быстро.  На  анализ  одного
определения требуется 1 мин. Чувствительность метода достаточно высока.
С его помощью можно определить вещество на уровне пикомолей.

Для гетерогенных методов характерно проведение анализа в

двухфазной системе с участием твердой фазы – носителя и обязательна