Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Наиболее распространенным неконкурентным методом является

«сэндвич»  метод.  При  его  выполнении  на  твердой  фазе  иммобилизуют
первичные  антитела  с  их  последующей  блокировкой.  Затем  к  ним
прибавляют  исследуемое  вещество,  содержащее  антиген,  и  инкубируют.
После  инкубации  комплекс  антиген–антитело  отмывают  от  несвязавшегося
антигена и добавляют вторичные антитела, меченные ферментом, и проводят
детекцию.

Конкурентный метод ИФА

Конкурентный метод ИФА подразделяется на несколько видов: по типу

детекции (прямой конкурентный, косвенный (непрямой) конкурентный) и по
типу иммобилизованного на твердой фазе вещества (антиген или антитело).

Прямой конкурентный вариант ИФА

Для обнаружения или количественного определения растворимых

антигенов  применяют  прямой  конкурентный  вариант  ИФА  с
иммобилизованным  на  твердой  фазе  антигеном.  Для  этого  используют
антиген-специфические  антитела,  конъюгированные  с  соответствующим
детектором (например, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, рутений или
флуоресцеин).  На  твердую  фазу  иммобилизуют  стандартный  антиген  с
последующей  блокировкой.  Конъюгированное  с  ферментативной  меткой
антитело инкубируют с исследуемым веществом  (растворимым  антигеном).
Затем  эту  смесь добавляют  к иммобилизованному  антигену,  инкубируют,  а
потом  отмывают  от  несвязавшегося  комплекса  антиген–антитело.
Следующий  шаг  заключается  в  добавлении  подходящего  субстрата  для
используемого  в  качестве  метки  фермента.  Ингибирование  реакции,
обусловленное  наличием  2  антигенов  в  системе,  по  сравнению  с
контрольным образцом  без  конкурентного растворимого  антигена,  является
обратно пропорциональным значению количества исследуемого вещества.

Выполнение

прямого

конкурентного

варианта

ИФА

иммобилизованным на твердой фазе антителом аналогично прямому
конкурентному ИФА с иммобилизованным на твердой фазе антигеном,