Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

В каждую лунку планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора

№ 2 (конъюгат) и помещают в термостат при температуре (37 ± 1) °С на 1 ч.

Отмывку планшета проводят согласно п. 5, повторив процедуру

не менее 5 раз.

Во все лунки планшета вносят по 50 мкл раствора ТМБ. Планшет

помещают в тёмное место и выдерживают в течение 15

−

20 мин при

температуре (23 ± 2) °С.

Реакцию останавливают добавлением по 25 мкл стоп-реагента во

все  лунки  и  проводят  учет  результатов.  В  лунках,  где  прошла  реакция,
появится  окрашивание  разной  степени  интенсивности.  Лунки  первого  ряда
(контроль конъюгата) должны оставаться неокрашенными.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учёт результатов проводят фотометрически при длине волны 450 нм в

в течение 10 мин после остановки реакции. Вычисляют средние
арифметические показателей оптической плотности (ОП) одноимённых
лунок.

Критерии приемлемости результатов:

−

среднее значение показателей ОП в лунках с контролем

конъюгата (КК) не превышает 0,10 (визуально окрашивания лунок не видно);

−

среднее значение показателей ОП в лунках с референс-

сывороткой без разведения (А) больше 1,0, но меньше 2,5;

−

соотношение средних показателей ОП с разведениями референс-

сыворотки (растворы А, B, C, D) следующие: ОП раствора А > ОП раствора
В > ОП раствора С > ОП раствора D;

−

среднее значение показателей ОП раствора D в 1,5

−

2,0 раза

больше среднего значения показателей ОП отрицательного контроля.

Рассчитывают

уровень

специфических

IgE-антител

аллергенспецифических сыворотках (положительный контроль) (табл. 2).