Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

образования  зависит  от  соотношения  содержания  трипсина  к  белку  в
реакционной  смеси.  Для  предотвращения  автогидролиза  растворы  протеаз
готовят  при  рН,  отличном  от  оптимального  (например,  при  рН  5  для
трипсина),  благодаря  чему  фермент  не  переходит  в  активное  состояние  до
момента разведения с буферным раствором.

В некоторых случаях, при использовании трипсина для расщепления

пептидных  связей  белка  с  молекулярной  массой  более  100  000  Да,  может
потребоваться защита лизиновых остатков путем получения производных с
лимонной  или  малеиновой  кислотой,  так  как  в  противном  случае  может
образоваться слишком большое число пептидных фрагментов.

Требования к реагентам для расщепления пептидных связей.

Под

реагентами

процедурах

пептидного

картирования

подразумеваются химические агенты и ферменты, используемые для
расщепления пептидных связей.

Требования к квалификации и качеству реагентов должны быть

указаны в нормативной документации.

Использование реагентов, особенно ферментов, квалификации и

качества отличных от установленной в ходе валидации методики, например
другого производителя, нежели указано в нормативной документации, может
привести к невоспроизводимости хроматографических профилей.

В случаях, когда требуется какая-либо специальная подготовка

реагента, например, для обеспечения определённой чистоты фермента или
химического агента, эти процедуры должны быть описаны в нормативной
документации

Установление оптимальных условий для расщепления пептидных

связей.

Факторы, которые влияют на полноту и эффективность расщепления

протеинов, являются факторами, оказывающими влияние на химические и
ферментативные реакции.