Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

При элюировании рекомендуется низкая скорость изменения состава.

Градиент оптимизируют, добиваясь четкого разделения между всеми
реперными пиками, выбранными в качестве «маркерных» пиков для
проводимого испытания.

Детектирование

Наиболее распространенным детектором при пептидном картировании

является спектрофотометрический детектор, с определением поглощения при
аналитической  длине  волны  в  интервале  от  200 нм  до  280  нм  (обычно  214
(215)  нм,  могут  использоваться  так  же  длины  волн  210,  256  нм).  Для
повышения  информативности,  используются  также  флуориметрический  и
масс-спектрометрический детекторы.

Другие параметры.

Для достижения хорошей воспроизводимости, как правило, требуется

контроль температуры колонки, которая варьируется в широких пределах от
25 до 60

С. Скорость подвижной фазы составляет от 0,1 мл/мин до 2,0

мл/мин.

РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК
Целью валидированного метода характеристики протеина методом

пептидного картирования является определение как минимум 95 %
теоретического состава структуры белка.

Использование стандартного образца параллельно с испытуемым

пептидом является необходимым условием при разработке и валидации
методик пептидного картирования.

Разработка методики.

В ходе разработки методики пептидного картирования осуществляется

подбор  условий  подготовки  белка  к  гидролизу  и  описываются
последовательности  аминокислот  для  каждого  пептидного  фрагмента,
получаемого в результате гидролиза.

Установление первичной структуры пептидных фрагментов

(последовательности аминокислот), образованных в ходе гидролиза