Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

разведения для построения калибровочной зависимости в диапазоне 0 –
2 МЕ/мл. После разведения определение следует провести в течение 30 мин.

Ход определения

Определение в пробирках
200 мкл разбавленного стандартного, контрольного или исследуемого

образца вносят в пробирки, инкубируют в течение 3-4 мин при температуре
37

С, прибавляют 50 мкл предварительно прогретого реактива факторов,

инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37

С и прибавляют 50 мкл

раствора хромогена.

Определение в микропланшетах
В лунки микропланшета вносят по 50 мкл разбавленного стандартного,

контрольного или исследуемого образца, инкубируют в течение 3-4 мин при
37°С, прибавляют 50 мкл предварительно прогретого реактива факторов,
инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37

С и прибавляют 50 мкл

раствора хромогена.

Кинетический метод определения
После прибавления раствора хромогена в течение 2

−

10 мин измеряют

изменение оптической плотности раствора при 405 нм.

Определение по конечной точке
После прибавления раствора хромогена смесь продолжают

инкубировать при температуре 37

С в течение 2

−

10 мин, после чего для

остановки реакции прибавляют 50 мкл 20% уксусной или 2% лимонной
кислоты. Измеряют оптическую плотность раствора против буфера при
405 нм.

Расчеты

Строят зависимость изменения оптической плотности в минуту (для

кинетического метода) или оптической плотности (для определения по
конечной точке) разведений стандартного раствора от концентрации в них