Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

г/л бычьего сывороточного альбумина (1:4; 1:8; 1:16; 1:32; 1:64; 1:128; 1:256).

При использовании гелевого метода (Метод В) разведения испытуемого

образца готовят с использованием 0,9% раствора натрия хлорида или

буферного раствора низкой ионной силы (LISS).

2. Подготовка стандартных образцов содержания анти-D антител. В

качестве стандартных образцов используют 5% раствор иммуноглобулина

человека, содержащий 0,0475 МЕ/мл анти-D антител и имеющий

номинальный титр в реакции гемагглютинации 1:8 (положительный

стандартный образец) и 5% раствор иммуноглобулина человека, содержащий

анти-D антитела в разведении не более 1:2 (отрицательный стандартный

образец). Содержание анти-D антител в положительном стандартном образце

является максимально допустимым для препаратов иммуноглобулинов

человека для внутривенного введения. Подготовку стандартных образцов

проводят в соответствии с инструкцией по применению. Анализ проводят с

образцами, разведенными фосфатным буферным раствором (рН 7,4±0,1),

содержащим 2 г/л бычьего сывороточного альбумина, до содержания белка

25 г/л.

3. Подготовка раствора папаина. Лиофилизат папаина растворяют в

соответствии с инструкцией производителя. Инкубируют при температуре

(37±0,5)

С в течение 10–15 мин. Раствор используют свежеприготовленным.

Возможно хранение раствора при температуре(6±2)

С в течение 5 сут или

при температуре минус (21±1)°С в течение 6 мес. Раствор после оттаивания

повторному замораживанию не подлежит.

Подготовка

суспензии

стандартных

эритроцитов.

Свежеприготовленные D-положительные эритроциты (хранившиеся не более

3 сут), полученные не менее чем от 3 доноров, центрифугируют в течение 10

мин при 1500–2000 об/мин при комнатной температуре. Надосадочную

жидкость сливают, осадок ресуспендируют в десятикратном объеме

фосфатного буферного раствора и центрифугируют 10 мин при тех же

условиях. Процедуру повторяют не менее 3 раз, до получения прозрачной

надосадочной жидкости.

В стеклянную пробирку вносят равные объемы промытых эритроцитов

и раствора папаина, инкубируют в течение 15 мин при температуре (37±0,5)

С, а затем центрифугируют при 1500–2000 об/мин в течение 10 мин. После

удаления надосадочной жидкости осадок ресуспендируют в десятикратном

объеме фосфатного буферного раствора и центрифугируют при тех же

условиях.

Для приготовления 3% суспензии 1 объем осадка папаинизированных

эритроцитов ресуспендируют в 32 объемах фосфатного буферного раствора,

содержащего 2 г/л бычего сывороточного альбумина.

Аналогичным образом приготавливают 3% суспензию D-

отрицательных эритроцитов, полученных от 1

−

3 доноров.