Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Гелевый метод основан на использовании гелевой карты,

представляющей собой пластиковый планшет с микропробирками,
наполненными гелевыми колонками. Каждая микропробирка состоит из
дозирующей/инкубационной

камеры

колонки,

содержащей

полимеризованные  микросферы  декстрана  в  буферном  растворе  низкой
ионной  силы  (LISS),  смешанном  с  поливалентной  антиглобулиновой
сывороткой (сыворотка Кумбса).

В дозирующую/инкубационную камеру микропробирки вносят по 1

капле 0,8% суспензии стандартных эритроцитов человека группы крови А

(II) (первый ряд) и 0,8% суспензии эритроцитов человека группы крови В
(III) (второй ряд) и по 25,0 мкл соответствующего разведения испытуемого
образца (ИО). Пробы инкубируют при температуре (37±0,5)°С в течение 15
мин. По окончании инкубации пробы центрифугируют на специальной
центрифуге

(для

гелевых

карт)

стандартных

условиях

(запрограммированный режим) и оценивают агглютинацию.

Титр гемагглютининов определяют как максимальное разведение

испытуемого образца, при котором наблюдают распределение
агглютинированных эритроцитов в толще гелевой колонки или в её верхней
части. Неагглютинированные эритроциты оседают на дно микропробирки.
Разведение до содержания белка 30 г/л при определении титра не учитывают.

Примечания

1. Подготовка испытуемого образца. Испытуемый препарат разводят

солевым раствором (0,9% раствор натрия хлорида или буферный раствор

низкой ионной силы (LISS)) до содержания белка 30 г/л.

Готовят два ряда двукратных разведений испытуемого образца с

использованием 1% раствора бычьего сывороточного альбумина (1:2; 1:4;

1:8; 1:16; 1:32; 1:64; 1:128). При использовании гелевого метода (Метод В)

разведения препарата готовят с использованием 0,9% раствора натрия

хлорида или буферного раствора низкой ионной силы (LISS).

2. Подготовка суспензии стандартных эритроцитов. Эритроциты

человека группы крови А

(II), резус-отрицательные (свежеприготовленные,

не более 3 сут хранения) центрифугируют 10 мин при 1500–2000 об/мин при

комнатной температуре, надосадочную жидкость сливают. Полученный