Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

получения не менее чем пяти стандартных растворов, имеющих
концентрации белка, равномерно распределенные в интервале между 5

мкг/мл и 100 мкг/мл.

Испытуемый раствор

. Готовят раствор испытуемого лекарственного

средства в буферном растворе, указанном в фармакопейной статье, с
концентрацией белка, находящейся в пределах интервала концентраций
калибровочного графика.

Контрольный раствор.

Используют буферный раствор, применяемый

для приготовления стандартных и испытуемого растворов.

Метод А (без предварительного осаждения белка)

К 1,0 мл каждого

из  стандартных  растворов,  испытуемого  раствора  и  к  1,0  мл  контрольного
раствора,  прибавляют  по  5,0  мл  реактива  В.  Содержимое  пробирок
перемешивают  и  оставляют  на  10

−

30 мин при комнатной температуре.

Затем  в  каждую  пробирку  прибавляют  0,5  мл  реактива  Фолина,
разбавленного  перед  употреблением  водой  в  2  раза,  быстро  и  тщательно
перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Измеряют
оптическую  плотность  испытуемого  и  стандартных  растворов  на
спектрофотометре при длине волны 750 нм (или указанной в фармакопейной
статье),  используя  контрольный  раствор  в  качестве  раствора  сравнения.
Окраска остается стабильной в течение 2 часов. Допускается использование
коммерческого реактива Фолина-Чокалтеу.

Зависимость оптической плотности от концентрации белка носит

нелинейный  характер,  тем  не  менее,  если  интервал  концентраций,
используемых  для  построения  калибровочного  графика,  небольшой,  то  она
приближается  к  линейной.  Строят  зависимости  оптических  плотностей
стандартных  растворов  от  концентраций  белка  и  используют  линейную
регрессию  для  построения  калибровочной  кривой.  На  основании
калибровочной  кривой  и  оптической  плотности  испытуемого  раствора
определяют концентрацию белка в испытуемом растворе.