Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

растворе  натрия  хлорида.  Части  полученного  раствора  разводят  0,9  %
раствором  натрия  хлорида  для  получения  не  менее  трех  стандартных
растворов с концентрациями в интервале от 2 мг/мл до  10 мг/мл.

Испытуемый раствор

. Готовят раствор испытуемого лекарственного

средства в 0,9 % растворе натрия хлорида с концентрацией белка,
находящейся в пределах интервала концентраций стандартных растворов.

Контрольный раствор.

Используют 0,9 % раствор натрия хлорида.

Методика.

К 1,0 мл испытуемого раствора, каждого из стандартных

растворов и контрольного раствора прибавляют 4,0 мл биуретового реактива,
перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Измеряют
оптическую плотность испытуемого и стандартных растворов при длине
волны 540 нм, используя контрольный раствор в качестве раствора сравнения
(или указанной в фармакопейной статье, в пределах 540

−

650 нм).

Зависимость оптической плотности от концентрации белка носит

нелинейный  характер.  Однако  в  небольшом  интервале  концентраций,
используемых для построения калибровочного графика, она приближается к
линейной.  Строят  график  зависимости  оптических  плотностей  стандартных
растворов  от  концентраций  белка  и  используют  линейную  регрессию  для
построения  калибровочной  кривой.  На  основании  калибровочной  кривой  и
оптической  плотности  испытуемого  раствора  определяют  концентрацию
белка в испытуемом растворе.

Калибровочный график строят каждый раз при приготовлении новых

реактивов или использовании другого спектрофотометра, но не реже 1 раза в
3 мес.

Примечание

Приготовление 50 % раствора трихлоруксусной

кислоты.

В мерную

колбу вместимостью 500 мл помещают 250 г трихлоруксусной

кислоты и

растворяют в воде. Объем раствора доводят до метки водой и тщательно

перемешивают.

Срок годности 50 % раствора трихлоруксусной кислоты 1 мес.