Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

близкой к контрольной концентрации раствора стандартного образца (СО)
цианокобаламина – 0,05 мкг/мл.

В чашки Петри (6 чашек для построения стандартной кривой и 3 чашки

для  раствора  испытуемого  препарата)  одинакового  диаметра  с  ровным  и
плоским  дном,  установленные  на  строго  горизонтальной  поверхности
(регулируют  по  ватерпасу),  разливают  по  10–12  мл  расплавленной  и
охлажденной  до  температуры  48  –  50  °С  основной  среды,  засеянной
суспензией

Escherichia coli

113-3 из расчета от 4 до 6 мл суспензии на 200 мл

основной среды. После застывания среды в каждой чашке стерильным бором
по трафарету делают лунки в агаре: 6 лунок диаметром 8 мм под углом 60 °
друг к другу.

В 3 лунки (через одну) каждой из 6 чашек, используемых для

построения стандартной кривой, и 3 чашек

−

для раствора испытуемого

препарата,  вносят  по  0,1  мл  раствора  СО  контрольной  концентрации  (0,05
мкг/мл). В 3 лунки (через одну) каждой из 3 чашек препарата  вносят по 0,1
мл  одной  из  концентраций  остальных  растворов  СО,  а  также  раствора
испытуемого препарата. Чашки инкубируют при температуре 37 °С в течение
16 – 18 ч.

По окончании инкубации измеряют диаметры зон стимуляции роста

тест-микроорганизма  для  каждой  концентрации  растворов  СО.  После
измерения  зон  роста  для  всех  концентраций  рассчитывают  среднюю
величину  зоны,  учитывая  в  каждом  случае  3  чашки,  т.  е.  9  зон.  Затем
рассчитывают  среднюю  величину  зоны  для  контрольной  концентрации,
учитывая все чашки (27 зон).

По разности между средней величиной зоны контрольной

концентрации раствора (0,05 мкг/мл), рассчитанной из всех чашек, и средней
величиной  зоны  контрольной  концентрации  раствора  СО,  полученной  из  3
чашек  с  каждой  отдельной  концентрацией,  находят  поправку  к  величине
зоны  данной  концентрации.  Найденную  поправку  прибавляют  к  средней
величине зоны данной концентрации, если она положительная, и вычитают,