Капиллярное изоэлектрическое фокусирование

меркаптоэтанолом  или  дитиотрейтолом.  При  анализе  в  нередуцирующих
условиях  2-меркаптоэтанол  и  дитиотрейтол  не  используют.  Разделение  в
поперечно сшитых гелях оптимизируют модификацией буферного раствора
(как  указано  в  разделе  «Капиллярный  зонный  электрофорез»)  и  контролем
пористости  геля  во  время  его  приготовления.  Пористость  этих  гелей
регулируют изменением концентрации акриламида, а также его соотношения
со  сшивающим  реагентом.  Уменьшение  пористости  геля  ведет  к
уменьшению  подвижности  аналитов.  Из-за  неподвижности  таких  гелей
допустимо только электрокинетическое введение пробы.

Динамически модифицированные гели являются гидрофильными

полимерами,  как,  например,  линейный  полиакриламид,  производные
целлюлозы,  декстран  и  т.  п.,  которые  могут  быть  растворены  в  водных
разделительных  буферных  растворах  с  образованием  разделяющей  среды,
действующей как молекулярное сито. После приготовления они могут быть
введены  в  капилляр  под  давлением.  Замена  геля  перед  каждой  инжекцией
улучшает  воспроизводимость  разделения.  Пористость  гелей  увеличивается
при  использовании  полимеров  с  большей  молекулярной  массой  или
уменьшении  концентрации  полимера.  Для  выбранного  буферного  раствора
уменьшение пористости геля ведет к уменьшению подвижности компонентов
раствора.  Так  как  растворение  этих  полимеров  в  буферном  растворе  дает
растворы с низкой вязкостью,  может быть использован гидродинамический
или электрокинетический ввод пробы.

Капиллярное изоэлектрическое фокусирование

В изоэлектрическом фокусировании заряженные молекулы движутся

под воздействием электрического поля в рН-градиенте, созданном
амфолитами с широким диапазоном значений р

, растворенными в буфере

разделения.

Тремя основными этапами изоэлектрического фокусирования являются

введение пробы, фокусирование и мобилизация.