Величина рH образца и концентрирующих слоев выбирается так, чтобы быть
приблизительно на 3 единицы ниже, чем верхнее значение
p
K
a
глицина.
Поэтому, на пересечении этих слоев только около 0,1% глициновых молекул
имеют отрицательный заряд. Таким образом, быстродвижущиеся хлорид-
ионы постепенно замещаются ионами глицина, которые при рН 6,8 в
концентрирующем геле нейтрализуются и перестают участвовать в
проведении тока. Сопротивление верхней части концентрирующего геля
резко возрастает, а вместе с ним возрастает и напряженность поля.
Локализованные зоны высоковольтового градиента между передним и
задним ионными фронтами вызывают относительно высокую скорость
миграции белков в концентрирующем геле, которая не ограничивается
благодаря крупнопористой структуре этого геля.
На границе концентрирующего и разделяющего гелей белки достигают
высокоплотных слоев геля и замедляются из-за уменьшающегося размера
пор разделяющего геля. Более высокое значение pH, с которым фронт
электродного буферного раствора встречается в разделяющем геле, также
заставляет глицинат мигрировать быстрее, и напряженность поля падает, что
также снижает скорость движения белков. Таким образом, происходит
концентрирование пробы и все компоненты образца, независимо от
первоначальной высоты столбика пробы в лунке, входят в нижний гель
практически одновременно в виде узкой зоны с высокой концентрацией
белка.
В мелкопористом разделяющем геле начинается процесс медленной
миграции белков и их фракционирования в зависимости от молекулярных
масс, а то обстоятельство, что процесс разделения начинается с узкой
исходной зоны, обеспечивает высокую разрешающую способность системы
вцелом.
Оборудование
Прибор для электрофореза состоит из:
1) источника постоянного тока с регулируемым напряжением и со
Предыдущая < | 655 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF