После обесцвечивания гель промывают водой и либо высушивают,
либо оставляют в воде для хранения при температуре от 2 до 8 °С.
Окраска раствором нитрата серебра
Погружают гель в большой избыток фиксирующего раствора и
выдерживают в течение 1 ч. Фиксирующий раствор сливают, добавляют
новую порцию того же раствора и инкубируют, по крайней мере 1 ч или
оставляют на ночь. Сливают фиксирующий раствор и промывают гель в
большом избытке воды в течение 1 ч. После этого пропитывают гель в
течение 15 мин в 1 % растворе глутарового альдегида. Промывают гель
дважды по 15 мин большим количеством воды. Выдерживают гель в темноте
в свежеприготовленном 2 % растворе серебра нитрата в течение 15 мин.
Промывают гель три раза по 5 мин в большом количестве воды. Погружают
гель приблизительно на 1 мин в проявляющий раствор, пока не будет
достигнуто удовлетворительное окрашивание. Окрашивание прекращают в
момент проявления полосы в треке с минимальным количеством препарата
(например, 0,001 мкг). Останавливают развитие окраски погружением в стоп-
раствор на 15 мин. Ополаскивают гель водой.
Целесообразно использовать готовые наборы реактивов для
окрашивания гелей серебра нитратом.
Высушивание проявленных SDS-полиакриламидных гелей
В зависимости от используемого метода окрашивания подготовку геля
к высушиванию проводят различными способами:
– при окраске Кумасси после процедуры обесцвечивания гель
выдерживают в смеси 10,0 г глицерина и 92 мл воды очищенной не менее 2 ч
(возможна инкубация «на ночь»);
– при окраске нитратом серебра гель после заключительной процедуры
ополаскивания выдерживают в течение 5 мин в смеси 2,0 г глицерина и 98 мл
воды очищенной.
Погружают два листа пористой целлюлозной пленки в воду и
выдерживают в течение 5–10 мин. Растягивают один из листов на рамке для
Предыдущая < | 664 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF