Приготовление красящего раствора Кумасси

смешивают с 9 частями воды очищенной.

7) Приготовление буферного раствора для образцов (4×) для

электрофореза в восстанавливающих условиях с 2-меркаптоэтанолом. В

химическом стакане смешивают 4,7 мл воды очищенной, 0,5 мл 1М

буферного раствора трис-гидрохлорида (рН 6,8), 0,8 мл глицерина, 1,6 мл

10% раствора натрия додецилсульфата, 0,4 мл 2-меркаптоэтанола и 2 мг

бромфенолового синего. Раствор хранят при температуре 4–6 °С не более 1

мес.

8) Приготовление буферного раствора для образцов (4×) для

электрофореза в восстанвливающих условиях с дитиотреитолом. В

химическом стакане тщательно перемешивают 5,0 мл воды очищенной, 0,5

мл 1М буферного раствора трис-гидрохлорида (рН 6,8), 0,8 мл глицерина, 1,6

мл 10% раствора натрия додецилсульфата, 0,06 г 1,4-дитиотреитола и 2 мг

бромфенолового синего. Раствор используют свежеприготовленным.

9) Приготовление буферного раствора для образцов (4×) для

электрофореза в невосстанвливающих условиях. В химическом стакане

тщательно смешивают 5,1 мл воды очищенной, 0,5 мл 1М буферного

раствора трис-гидрохлорида (рН 6,8), 0,8 мл глицерина, 1,6 мл 10% раствора

натрия додецилсульфата и 2 мг бромфенолового синего. Раствор хранят при

температуре 4–6 °С не более 3 мес.

10) Приготовление красящего раствора Кумасси. Раствор готовят по

одному из способов приготовления (№ 1 или № 2):

Раствор № 1. Растворяют 0,3 г Кумасси бриллиантового R250 в смеси 100

мл спирта метилового или этилового и 100 мл воды очищенной.

Перемешивают до полного растворения (в течение 1 ч). Добавляют 25 мл

ледяной уксусной кислоты, доводят объем раствора водой очищенной до 250

мл и перемешивают. Хранят окрашивающий раствор в темной бутыли при

комнатной температуре. Раствор хранят при температуре 18-25

С в течение

2 мес.

Раствор № 2

. 1

,0 г Кумасси ярко-голубого R-250 помещают в химический

стакан, доводят до объема 250,0 мл этиловым спиртом, перемешивают не

менее 3,5 часов до полного растворения красителя, добавляют 100,0 мл

кислоты ледяной уксусной и доводят объем деионизованной водой до 1000,0

мл. Раствор хранят при температуре 18-25

С в течение 2 мес.

11) Приготовление обесцвечивающего раствора. К 400 мл спирта

метилового или этилового добавляют 100 мл ледяной уксусной кислоты,

доводят объем раствора до 1000 мл и перемешивают.

12) Приготовление фиксирующего раствора. К 250 мл спирта

метилового или этилового добавляют 0,27 мл 37 % раствора формальдегида,

доводят объем раствора водой очищенной до 500 мл и перемешивают.

13) Приготовление 1 % раствора глутарового альдегида. В мерную

колбу вместимостью 100 мл помещают 4 мл 25 % глутарового альдегида или

2 мл 50 % глутарового альдегида, доводят объем раствора водой очищенной

до метки и перемешивают.

14) Приготовление раствора серебра нитрата. Смешивают 2,75 мл 25 %