правило, меньшую вариабельность результатов анализа, чем методики,
основанные на предколоночной дериватизации.
Для количественного аминокислотного анализа могут быть
использованы приведенные ниже методы. Приборы и реактивы,
используемые для проведения этих испытаний, коммерчески доступны, как
правило, представлены на рынке в виде готовых решений (аминокислотные
анализаторы, работа которых основана на методиках с пост-колоночной
дериватизацией, и специализированные наборы для ОФ-ВЭЖХ методик,
основанных на предколоночной дериватизации). Кроме того, существует
множество модификаций этих методов, отличающихся приготовлением
реактивов, процедурой дериватизации, условиями хроматографического
разделения и так далее. Некоторые параметры могут варьироваться в
зависимости от конкретного оборудования и методики выполнения анализа.
Многие лаборатории используют несколько методик аминокислотного
анализа, так как каждая из них имеет свои преимущества.
МЕТОД 1. Пост-колоночная дериватизация с нингидрином
Ионообменная хроматография с пост-колоночной дериватизацией
нингидрином является одним из наиболее распространенных методов,
предназначенных для количественного аминокислотного анализа. Как
правило, для анализа большинства сложных физиологических образцов
используются хроматографические колонки на основе катионообменников в
литиевой форме, а экспрессное разделение на катионообменниках в
натриевой форме используется для более простых смесей аминокислот,
полученных при гидролизе белков (содержащих обычно 17 аминокислот).
Разделение аминокислот на ионообменной колонке достигается подбором рН
и ионной силы. Для улучшения разделения часто используют температурный
градиент.
При взаимодействии аминокислоты с нингидрином образуется продукт
характерного фиолетового или желтого цвета. Аминокислоты, за
Предыдущая < | 693 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF