background image

правило,  меньшую  вариабельность  результатов  анализа,  чем  методики, 
основанные на предколоночной дериватизации. 

Для  количественного  аминокислотного  анализа  могут  быть 

использованы  приведенные  ниже  методы.  Приборы  и  реактивы, 
используемые для  проведения этих испытаний, коммерчески доступны, как 
правило, представлены на рынке в виде готовых решений (аминокислотные 
анализаторы,  работа  которых  основана  на  методиках  с  пост-колоночной 
дериватизацией,  и  специализированные  наборы  для  ОФ-ВЭЖХ  методик, 
основанных  на  предколоночной  дериватизации).  Кроме  того,  существует 
множество  модификаций  этих  методов,  отличающихся  приготовлением 
реактивов,  процедурой  дериватизации,  условиями  хроматографического 
разделения  и  так  далее.  Некоторые  параметры  могут  варьироваться  в 
зависимости от конкретного оборудования и методики выполнения анализа. 
Многие  лаборатории  используют  несколько  методик  аминокислотного 
анализа, так как каждая из них имеет свои преимущества. 

 

МЕТОД 1. Пост-колоночная дериватизация с нингидрином 

Ионообменная  хроматография  с  пост-колоночной  дериватизацией 

нингидрином  является  одним  из  наиболее  распространенных  методов, 
предназначенных  для  количественного  аминокислотного  анализа.  Как 
правило,  для  анализа  большинства  сложных  физиологических  образцов 
используются хроматографические колонки на основе катионообменников в 
литиевой  форме,  а  экспрессное  разделение  на  катионообменниках  в 
натриевой  форме  используется  для  более  простых  смесей  аминокислот, 
полученных  при  гидролизе  белков  (содержащих  обычно  17  аминокислот). 
Разделение аминокислот на ионообменной колонке достигается подбором рН 
и ионной силы. Для улучшения разделения часто используют температурный 
градиент. 

При взаимодействии аминокислоты с нингидрином образуется продукт 

характерного  фиолетового  или  желтого  цвета.  Аминокислоты,  за 

Предыдущая <  | 693  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF