Хроматографируют маркерный раствор для определения рабочего
объема колонки, получая не менее 3 последовательных хроматограмм. На
хроматограмме должны присутствовать два основных пика: первый пик
соответствует высокомолекулярному декстрану, второй пик соответствует
глюкозе. Объем элюирования пика высокомолекулярного декстрана
(определенный в вершине пика) соответствует «мертвому» объему колонки
(
V
0
),
а объем элюирования пика глюкозы соответствует полному объему
элюента в колонке (
V
t
).
Хроматографируют каждый из калибровочных растворов. На каждой
полученной хроматограмме аккуратно интегрируют пик декстрана. Каждый
пик декстрана, а также пик глюкозы на хроматограмме маркерного раствора
для определения рабочего объема колонки, делят равноудаленными
перпендикулярами на
p
частей (
p
≥
60), соответствующих равным объемам
элюирования. Разбиение пиков на части и все последующие расчеты
молекулярно-массового распределения, согласно представленному ниже
алгоритму, выполняют, используя специализированное программное
обеспечение в автоматическом режиме.
Для каждой
i
-ой части пика (
𝑖 ∈
[1,
𝑝
]
), соответствующей объему
элюирования
V
i
, измеряют высоту (
y
i
) от базовой линии хроматограммы и
рассчитывают коэффициент распределения (
K
i
) по формуле (1):
𝐾
𝑖
=
𝑉
𝑖
−𝑉
0
𝑉
𝑡
−𝑉
0
,
(1)
где
V
₀
– «мертвый»
объем
(предел
эксклюзии)
колонки,
определенный по пику высокомолекулярного декстрана на
хроматограмме маркерного раствора для определения рабочего объема
колонки;
V
t
– полный объем элюента в колонке, определенный по пику
глюкозы на хроматограмме маркерного раствора для определения
рабочего объема колонки;
Предыдущая < | 724 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF