background image

В каждую из 3 ампул (флаконов) вносят 5 мл воды очищенной, встря-

хивают до образования гомогенной взвеси. Далее определение проводят

 

по 

методике в соответствии с ФС «Вакцина сибиреязвенная живая»

2. Активность (ПА.

 

Активность ПА должна быть не менее 50 ЕА/мл.

 

Определение  проводят  методом  иммунодиффузии  в  агаре  по  Оухтер-

лони

 

с иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным. Для приго-

товления агара  к 1 л 0,1 М фосфатного буферного раствора, рН (7,8 

±

  0,1) 

добавляют 1 % агара, 1 % желатина и 0,25 % раствор  фенола. Агар стерили-
зуют 15 мин при температуре (115 

±

  2) 

°

С и в горячем виде осветляют цен-

трифугированием при 2000 об/мин в течение 5 мин. Готовый агар разливают 
в чашки Петри, помещенные на строго горизонтальную поверхность, слоем 
толщиной  6  мм.  Стерильным  штампом

-

пробойником  вырезают  1  централь-

ную и 6 радиальных лунок, расстояние между центрами которых составляет 
10 мм (можно выполнять этот этап по трафарету). Агар из лунок удаляют.

 

Вакцину  последовательно  разводят  0,2  М  фосфатным  буферным  рас-

твором, рН (7,2 

±

 

0,1), до разведений 1:2; 1:4; 1:6; 1:8.  В центральную лунку 

вносят 0,04 мл цельного иммуноглобулина противосибиреязвенного лошади-
ного,  а  в  радиальные  лунки  по  часовой  стрелке 

– 

все  разведения  вакцины, 

начиная с цельного неразведенного препарата. Чашки помещают в эксикатор, 
содержащий воду очищенную, при температуре (19 

±

  1) 

°

С в течение 3 сут. 

Предварительный учет результатов проводят через 24 ч, окончательный 

– 

на 

3 сут.

 

Активность  ПА  оценивают  по  максимальному  разведению  вакцины, 

при котором образуется видимая линия

 

преципитации с иммуноглобулином 

противосибиреязвенным, и выражают в единицах активности (ЕА/мл).

 

Расчет ПА (

А

) в ЕА/мл проводят по формуле:

 

А

 

= ― , 

 

 V  

5308