background image

где

 

C

 

 

содержание тирозина в опытной пробе, мэкв

 

(среднее 

арифметическое из трёх

 

определений

); 

 

V

 

 

объём, в котором растворена

 

субстанция

мл

 

a

 

 

навеска субстанции, мг

 

Примечание.

 1. 

Приготовление 22 % раствора гемоглобина. 2,2 г сухого 

гемоглобина растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 10

 

мл. 

 

2.

 

Приготовление  раствора

 

субстрата.  К 

8,0 

мл

  1 

М

 

раствора  натрия 

гидроксида

 

прибавляют 

72,0 

мл

 

воды,  36

,0 

г

 

мочевины  и  10

,0 

мл

  22  % 

раствора  гемоглобина.  Смесь  термостатируют  в  течение  45  ±  15  мин

 

при 

25 °

С,  после  чего  к  ней  прибавляют

 

раствор  4  г

 

мочевины  в  10  мл

 

М

 

раствора калия дигидрофосфата

рН полученного раствора должен быть 7,5

-

8,0. Хранят при 5

±3 °

С

 

не более 10 суток.

 

2.  Амидазная  активность. 

Не  менее  6,0  микрокаталь/мг

.

 

Метод 

основан  на  определении  количества 

п

-

нитроанилина,  освобождаемого 

трипсином  из  синтетического  субстрата 

– 

гидрохлорида

 

N

α

-

бензоил

-DL-

аргинин

-

п

-

нитроанилида  (БАПНА

CAS 

911-77-3

).  Все  растворы 

используются свежеприготовленными.

 

Субстанция имеет активность в 1 микрокаталь, если при её воздействии 

на субстрат БАПНА в течение одной секунды

 

освобождается 1 микромоль 

п

-

нитроанилина

Раствор п-нитроанилина.

 

Около 50 мг (точная навеска) нитроанилина 

растворяют  в  мерной  колбе  вместимостью  100  мл  в  смеси

  0,1 

М

 

трис

-

гидрохлорид

 

буферный

 

раствор

 pH 7,8—

диметилсульфоксид

уксусной 

кислоты раствор 

М

 96:4:20.  

1  мл  полученного  раствора  помещают  в  мерную  колбу  вместимостью 

100 мл и доводят объем раствора

 

той же

 

смесью до метки. Получают раствор 

с концентрацией около 5 мкг/мл. При необходимости раствор дополнительно

 

разбавляют  так,  чтобы

 

оптическая  плотность  при  длине  волны  405  нм 

составляла  0,35  ±  0,15.  Измеряют  оптическую  плотность  полученного 
раствора при длине волны 405 нм по сравнению со смесью 4,8

 

мл 0,1 М трис

-

гидрохлорид буферного раствора pH 7,8, 0,2 мл диметилсульфоксида и 1 мл 
уксусной кислоты

 

раствора 5

 

М

Предыдущая <  | 4944  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF