background image

Коэффициент  наномолярной  экстинкции

 

п

-

нитроанилина 

(

K

л∙нмоль

-1

∙см

-1

вычисляют по формуле:

 

𝐾𝐾

=

𝐴𝐴

405

138,12

100

100

∙ 𝑃𝑃

𝑎𝑎 ∙

1 000 000 000

 

где

 

A

405 

 

оптическая плотность раствора 

п

-

нитроанилина при 

длине волны 405 нм;

 

 

а

 

 

а

 – 

навеска нитроанилина, мг;

 

 

138,12 

 

молекулярная масса нитроанилина;

 

 

100, 100

 

 

разведение навески нитроанилина;

 

 

 

дополнительное разведение раствора 

п

-

нитроанилина 

(если применялось

); 

 

1 000 000 000

 

 

пересчёт моль в наномоль

Испытуемый  раствор. 

Около  20,0  мг  (точная  навеска)  субстанции 

помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 0,1 М трис

-

гидрохлорид  буферном  растворе  pH  7,8  и  доводят  объем  раствора  тем  же 
растворителем до метки.

 

Раствор  субстрата. 

100  мг  (точная  навеска)  гидрохлорида

 

БАПНА 

растворяют  при  35±2  °С  в  10  мл  диметилсульфоксида.  При  хранении  при 
температуре от 2 до 10 °С

 

раствор пригоден для использования в течение 3 

суток

 

Проведение  анализа. 

В  три  опытные  пробирки  вместимостью  10  мл

 

и 

три  контрольные  пробирки

 

вносят  по  4,6  мл  0,1  М  трис

-

гидрохлорида 

буферного раствора pH 7,8

.  

В  контрольные  пробирки  прибавляют  1  мл  0,5  М  уксусной  кислоты, 

перемешивают и прибавляют 0,2 мл испытуемого раствора

.  

В опытные пробирки прибавляют по 0,2

 

мл испытуемого раствора.

 

Все пробирки термостатируют

 

в течение

 5 

мин при 25,0±0,5 °С. 

 

Во все пробирки

 

в определённом порядке

 

с интервалом 30 с прибавляют 

по  0,2  мл  раствора  субстрата  и  продолжают  термостатирование

 

при 

25,0±0,5 

°С  в  течение  900  с

Для  остановки  реакции,  во

 

все  опытные 

пробирки

 

в  том  же  порядке

 

с  интервалом  в  30  с  прибавляют  по  1,0  мл 

4945