Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Полимеразная цепная реакция

ОФС.1.7.2.0013.15

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) представляет собой многократное

ферментно-опосредованное умножение (амплификацию) заданного участка
ДНК длиной от десятков до нескольких тысяч пар оснований (п.о.), границы
которого соответствуют коротким олигонуклеотидным последовательностям
– праймерам, т.е. ПЦР представляет собой циклический синтез

in vitro

выбранного  фрагмента  ДНК.  Каждый  цикл  состоит  из  трёх  этапов:
денатурации,  гибридизации  и  синтеза  цепи  ДНК.  Для  выявления  РНК-
содержащих  микробов  ПЦР  проводят  после  процедуры  обратной
транскрипции.

Специфичность реакции обеспечивается прежде всего правильным

выбором праймеров.

По окончании реакции наличие искомого фрагмента выявляют

различными методами. Наиболее распространены электрофоретическое
разделение и детекция флуоресценции в режиме реального времени.

ПЦР может применяться как качественная реакция (по принципу «есть

– нет»), так и как полуколичественный или количественный метод.

Для проведения анализа могут быть использованы наборы реагентов

для ПЦР, зарегистрированные в установленном порядке и валидированные
для соответствующих целей.

Пробоподготовка

Определяемая ДНК может быть выделена из исследуемого образца или

может вноситься в реакцию без предварительной подготовки.

В первом случае следует подтвердить, что процедура выделения не