Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

влияет на результаты ПЦР. С этой целью целесообразно провести
аналогичную процедуру выделения с использованием стандартного образца
ДНК. Процедура выделения может быть ручной или в автоматическом
режиме.

Во втором случае при внесении в реакцию тестируемого материала без

проведения его предварительной подготовки, необходимо подтвердить
отсутствие влияния на результаты ПЦР веществ, входящих в состав
исследуемого образца. Для этого целесообразно использовать метод добавок.

Необходимо предусмотреть использование стандартных или

контрольных образцов для оценки эффективности выделения нуклеиновых
кислот.

Используемое оборудование, реагенты, стандартные и контрольные

образцы,  приготовление  растворов  и  все  этапы  пробоподготовки  должны
быть  указаны  в  фармакопейной  статье  и  нормативной  документации  или
должна  быть  приведена  ссылка  на  инструкцию  по  применению  набора
реагентов для выделения ДНК/РНК.

Проведение реакции

ПЦР проводят в буферно-солевом растворе с определенным значением

рН,  содержащем  необходимую  концентрацию  ионов  магния,  четыре  вида
дезоксирибонуклеозидтрифосфатов  и  термостабильную  Taq-полимеразу
(ДНК-полимераза  ряда  микроорганизмов,  например,

Termus aquaticus

обладает  уникальным  свойством  сохранять  активность  при  температуре
95°С). Состав буферного раствора, концентрацию реагентов, приготовление
растворов указывают в фармакопейной статье и нормативной документации
или приводят ссылку  на  инструкцию по применению набора  реагентов для
ПЦР.  Реакция  инициируется  парой  праймеров,  каждый  из  которых
представляет собой  последовательность из 20-25 нуклеотидов, один праймер
комплементарен  последовательности  ДНК  с  5’-конца  амплифицируемого
участка,  а  другой  –  с  3’-конца.  Последовательность  праймеров,  их
концентрацию  указывают  в  фармакопейной  статье  и  нормативной