Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Изоэлектрическое фокусирование

ОФС.1.7.2.0021.15

Метод изоэлектрического фокусирования используется для оценки

генно-инженерных  препаратов,  а  также  некоторых  высокоочищенных
биотехнологических  препаратов  (содержание  основного  компонента  не
менее  95  %),  предназначенных  для  применения  в  качестве  лекарственных
средств.

Электрофоретическое разделение белков методом изоэлектрического

фокусирования происходит под действием электрического поля в градиенте
рН  в  соответствии  с  их  изоэлектрической  точкой  (рI).  Местоположение
каждого  белка  определяется  значением  его  изоэлектрической  точки.  При
достижении белком изоэлектрической точки в градиенте рН его суммарный
заряд становится равным нулю и он перестает перемещаться в электрическом
поле. В результате электрофоретического разделения исследуемого вещества
может происходить диффузия белковых молекул из зоны фокусирования, но,
попадая в более кислую или щелочную среду, молекулы белка будут терять
нейтральность  и  под  действием  электрического  поля  снова  возвращаться  в
зону изоэлектрической точки. Для создания градиента рН применяют смеси
синтетических  полиаминополикарбоновых  кислот  (амфолиты)  в  диапазоне
изоэлектрических  точек  (рI)  от  3,0  до  10,0  единиц  рН.  Смесь  амфолитов
помещают  в  стабилизационную  среду  (полиакриламидный  или  агарозный
гель) и подают напряжение, в результате чего создается градиент, в котором
рН увеличивается в направлении от анода (+) к катоду (

−

Для ускорения процесса фракционирования белков используют

максимально

допустимую

напряженность

электрического

поля.