Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Ограничением служит невозможность эффективного отвода выделяемого
тепла. Использование тонких гелей и эффективного охлаждения пластинки с
помощью водяного термостата предотвращает перегревание геля и
способствует хорошему разделению белков.

Максимальное различие между значениями рI (∆ рI) компонентов,

определяют по формуле:

∆pI = 3 x

�

𝐷

(

𝑑𝑝𝐻

𝑑𝑥

)

𝐸−

(

𝑑𝑢

𝑑𝑝𝐻

)

где:

−

коэффициент диффузии белка;

dpH/dx – градиент рН;

Е – напряженность электрического поля, выраженное в вольтах на

сантиметр;

(-du/dpH) – изменение подвижности вещества при изменении рН в

области, близкой к pI.

Формула показывает, что хорошее разрешение может быть получено

для  веществ  с  низким  коэффициентом  диффузии  и  достаточно  большим
значением  изменения  подвижности  в  точке,  близкой  к  изоэлектрической.
Хорошему  разрешению  способствует  высокая  напряженность  поля  и
плавный  градиент  рН.  Разрешающая  способность  изоэлектрического
фокусирования  при  использовании  геля,  приготовленного  с  применением
амфолитов,  составляет  0,02  единицы  рН,  а  при  использовании
иммобилизованных  гелей  (с  химически  фиксированным  градиентом  рН)

−

около 0,001 единицы рН.

Испытанию подлежат субстанция и очищенный белок до добавления

стабилизаторов,  наполнителей,  консервантов  и  других  компонентов,
входящих  в  состав  лекарственной  формы.  Методика  также  может
использоваться  для  анализа  готовой  продукции  в  сравнении  со стандартным
образцом  (стандартные  образцы  указываются  в  фармакопейной  статье  и
нормативной документации).

Практические аспекты