background image

Ограничением  служит  невозможность  эффективного  отвода  выделяемого 
тепла. Использование тонких гелей и эффективного охлаждения пластинки с 
помощью  водяного  термостата  предотвращает  перегревание  геля  и 
способствует хорошему разделению белков. 

Максимальное  различие  между  значениями  рI  (∆  рI)  компонентов, 

определяют по формуле: 

∆pI = 3 x

 

𝐷

(

𝑑𝑝𝐻

𝑑𝑥

)

𝐸−

(

𝑑𝑢

𝑑𝑝𝐻

)

,

 

где:

  

 коэффициент диффузии белка; 

dpH/dx – градиент рН;

 

Е  –  напряженность  электрического  поля,  выраженное  в  вольтах  на 

сантиметр; 

(-du/dpH)  –  изменение  подвижности  вещества  при  изменении  рН  в 

области, близкой к pI. 

 

Формула  показывает,  что  хорошее  разрешение  может  быть  получено 

для  веществ  с  низким  коэффициентом  диффузии  и  достаточно  большим 
значением  изменения  подвижности  в  точке,  близкой  к  изоэлектрической. 
Хорошему  разрешению  способствует  высокая  напряженность  поля  и 
плавный  градиент  рН.  Разрешающая  способность  изоэлектрического 
фокусирования  при  использовании  геля,  приготовленного  с  применением 
амфолитов,  составляет  0,02  единицы  рН,  а  при  использовании 
иммобилизованных  гелей  (с  химически  фиксированным  градиентом  рН) 

 

около 0,001 единицы рН. 

Испытанию  подлежат  субстанция  и  очищенный  белок  до  добавления 

стабилизаторов,  наполнителей,  консервантов  и  других  компонентов, 
входящих  в  состав  лекарственной  формы.  Методика  также  может 
использоваться  для  анализа  готовой  продукции  в  сравнении  со стандартным 
образцом  (стандартные  образцы  указываются  в  фармакопейной  статье  и 
нормативной документации). 

Практические аспекты 

2934